本文關鍵詞：制備轉基因模型小鼠的基礎:人白細胞抗原A0206基因慢病毒載體構建及鑒定

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【摘要】：背景:有研究表明人白細胞抗原-A*0206亞型與鼻咽癌的發(fā)生正相關,但目前還沒有相應的轉基因動物模型,以用于從整體水平評價HLA-A*0206與鼻咽癌的關系及進一步研究免疫和基因療法。目的:構建pL VX-CMV-人白細胞抗原-A*0206-HA-mC MV-Zs Green載體,并進行病毒包裝,以用于HLA-A*0206轉基因小鼠制作。方法:合成HLA-A*0206序列,利用聚合酶鏈式反應在5’端引入Eco RⅠ酶切位點,在3’端引入Bam HⅠ酶切位點和流感病毒血凝素標簽,Eco RⅠ和Bam HⅠ雙酶切目的片段及p LVX-CMV-m CMV-Zs Green質粒,連接酶切產物,轉化到大腸桿菌JM109感受態(tài)細胞,雙酶切及測序鑒定陽性重組質粒,陽性重組質粒與四質粒包裝系統(tǒng)共轉染表達SV40大T抗原的人腎上皮細胞系293T細胞,產生含目的基因的慢病毒。結果與結論:凝膠電泳及測序證實人白細胞抗原A*0206基因成功導入pL VX-CMV-mC MV-ZsG reen骨架質粒,轉染293T細胞48 h后的轉染率為92%。熒光法測定病毒滴度,獲得病毒滴度約為5×108。結果證實,實驗成功構建了含巨細胞病毒啟動子、HLA-A*0206、流感病毒血凝素標簽以及ZsG reen報告基因的慢病毒。
【作者單位】： 廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院動物實驗中心;
【關鍵詞】： 慢病毒屬 鼻咽腫瘤 轉基因小鼠 綠色熒光蛋白質類 組織構建 組織工程 鼻咽癌 慢病毒 人白細胞抗原 綠色熒光蛋白 四質粒包裝系統(tǒng) 流感病毒血凝素 巨細胞病毒啟動子 質粒
【基金】：廣東省科學技術廳科技基礎條件建設項目(2011B060300020)~~
【分類號】：R-332;R739.63
【正文快照】： 0引言Introduction人白細胞抗原A*0206基因慢病毒載體的構建及鑒定實驗相關試劑及儀器:中國華南地區(qū)是鼻咽癌高發(fā)病區(qū)[1-2]。影響鼻咽癌發(fā)病試劑及儀器來源率的因素包括遺傳因素[3-4]、EB病毒感染和環(huán)境因素[5-8]。HLA-A*0206 InvitrogenSimons等[9]首先通過研究華裔新加坡人,

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前3條

1 何迎春;田道法;盧芳國;毛積芳;;人突變型p53和EB病毒LMP1轉基因小鼠的建立[J];第四軍醫(yī)大學學報;2006年01期

2 藍軻,喬貴林,沈新民,張玲,呂麗春,姚開泰;鼻咽癌來源LMP1轉基因小鼠的制備[J];動物醫(yī)學進展;2002年01期

3 肖志強，姚開泰，，劉薇，盧光　;攜帶EB病毒潛伏膜蛋白基因轉基因小鼠的制備[J];生物化學與生物物理進展;1995年02期

【共引文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

1 何迎春;盧芳國;田道法;劉紅萍;;TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮細胞增殖與凋亡相關基因表達的關系[J];癌變.畸變.突變;2008年05期

2 潘秀芳,劉斌,郭長占,田楓,王兆綽;用顯微注射法制備攜帶Epstein-Barr病毒膜抗原基因——BLLF1的轉基因小鼠[J];北京醫(yī)科大學學報;2000年05期

3 柯霞;洪蘇玲;;鼻咽癌動物模型研究進展[J];重慶醫(yī)學;2010年11期

4 藍軻,喬貴林,沈新民,張玲,呂麗春,姚開泰;鼻咽癌來源潛伏膜蛋白1的表達誘發(fā)轉基因小鼠鼻咽不典型增生[J];動物醫(yī)學進展;2002年05期

5 何迎春;田道法;盧芳國;江潔瓊;賀安意;陳艷;;二亞硝基哌嗪對轉基因小鼠TNF受體相關因子2和p16的表達[J];中國耳鼻咽喉頭頸外科;2008年09期

6 何迎春;劉宇勤;廖端芳;戴娜;何蘭;范婧瑩;田道法;;不同中醫(yī)臨床證型下行型鼻咽癌組織細胞核蛋白質差異表達的初步研究[J];癌變·畸變·突變;2013年03期

7 陳祁青;金紅婷;應俊;王萍兒;吳承亮;童培建;肖魯偉;;右歸飲含藥血清對骨髓間充質干細胞成軟骨分化的促進作用及其microRNA表達譜分析[J];中華中醫(yī)藥雜志;2015年05期

8 何迎春;田道法;劉剛;盧芳國;范婧瑩;吳新正;羅齊平;;益氣解毒方對TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮細胞增殖及細胞周期的影響[J];湖南中醫(yī)藥大學學報;2008年05期

9 吳新正;戴娜;田道法;何迎春;劉剛;劉湘;;益氣解毒方對癌前病變鼻咽黏膜超微病理組織的逆轉效應[J];湖南中醫(yī)藥大學學報;2012年03期

10 何迎春;田道法;劉紅萍;盧芳國;吳新正;;TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮組織生物學表型特征及細胞周期特點分析[J];醫(yī)學研究生學報;2008年09期

中國博士學位論文全文數據庫 前8條

1 吳新正;TgN（p53mt-LMP1）/HT轉基因小鼠鼻咽黏膜上皮細胞生物學表型特征與p53信號傳導通路相關性及益氣解毒方干預研究[D];湖南中醫(yī)藥大學;2010年

2 王化修;TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽上皮細胞間隙連接與鼻咽上皮細胞癌變的相關性及益氣解毒方的干預效應[D];湖南中醫(yī)藥大學;2011年

3 呂麗春;EBV易感轉基因小鼠動物模型的建立[D];中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學;2003年

4 楊玉芳;用LMP1構建重組慢病毒載體及建立轉基因小鼠模型[D];第一軍醫(yī)大學;2004年

5 李萍;鼻咽癌雞胚絨毛尿囊膜移植瘤模型的建立及其在腫瘤生物學行為研究上的應用[D];廣西醫(yī)科大學;2010年

6 柯霞;靶向脫氧核酶抑制鼻咽癌EBV-LMP1基因表達的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學;2010年

7 張征崢;microRNA-155調節(jié)小鼠乳腺癌細胞株4T1生物學行為及相關機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2014年

8 張曄;慢病毒介導PTL基因干預的星形膠質細胞在帕金森病模型中的保護作用研究[D];蘇州大學;2014年

中國碩士學位論文全文數據庫 前5條

1 李欣;EB病毒早期基因BHRF1轉基因模型鼠的建立[D];青島大學;2009年

2 賀安意;轉LMP1-mtP53基因小鼠癌前病變的器官靶向性及益氣解毒方的干預效應研究[D];湖南中醫(yī)藥大學;2007年

3 文川;高表達HPPCn轉基因小鼠的鑒定及評價HPPCn在肝癌發(fā)生過程中的作用[D];湖南農業(yè)大學;2012年

4 周計丹;豬O3FAR1基因啟動子的克隆及轉錄調控分析[D];華中農業(yè)大學;2014年

5 賈中發(fā);Purα與Egr-1對淀粉樣前體蛋白（APP）轉錄調控作用的研究[D];寧夏醫(yī)科大學;2014年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前5條

1 藍軻,任彩萍,謝鷺,何志巍,甘潤良,姚開泰;兩種不同來源LMP1致瘤性的比較研究[J];癌癥;2001年10期

2 楊玉芳,丁彥青,石益民,劉換新;嗜上皮細胞特異性啟動子ED-L2轉基因小鼠的建立[J];第四軍醫(yī)大學學報;2003年21期

3 姚開泰;從死因回顧調查資料看湖南省鼻咽癌流行病學的一些特點并探索其發(fā)病機理[J];湖南醫(yī)學院學報;1982年01期

4 張玲,藍軻,馮湘玲,喬貴林,沈新民,石益民,李虹,姚開泰;用鼻咽相對特異性調控區(qū)建立N-LMP1轉基因小鼠[J];生物化學與生物物理學報;2003年12期

5 藍軻;EB病毒BNLF-1基因研究的新進展[J];生命科學;2001年01期

【相似文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

1 張榮;;可溶性人白細胞抗原-Ⅰ臨床研究現狀[J];國際免疫學雜志;2006年02期

2 英華;;人白細胞抗原[J];國外醫(yī)學情報;1981年06期

3 孫成文,徐茜,李蕊,張秀云,孔繁華;一種改進的 HLA-B27 檢測方法[J];軍事醫(yī)學科學院院刊;1997年02期

4 周曄,劉海英,陳燕,鄧安梅,仲人前;原發(fā)性膽汁性肝硬化與人白細胞抗原相關性分析[J];中華消化雜志;2004年10期

5 張?zhí)祢?劉雨生;;可溶性人白細胞抗原G的研究進展[J];國外醫(yī)學(計劃生育/生殖健康分冊);2007年06期

6 海榮,畢力夫,蘇秀蘭;我國少數民族人白細胞抗原多態(tài)性研究概況[J];內蒙古醫(yī)學院學報;2004年04期

7 王增慧;郭秋霞;趙綺華;何旦莎;鄧維意;;人白細胞抗原庫的建立[J];廣州醫(yī)學院學報;1990年02期

8 程運洪;;癌癥患者人白細胞抗原G檢測結果分析[J];檢驗醫(yī)學與臨床;2014年17期

9 宋芳吉,陳耀華,蘇霄漢,劉子勇,李惠剛,徐沈玉,陳有余,范中來;產后陰道血篩選HLA人白細胞抗原定型血清[J];中國醫(yī)科大學學報;1979年02期

10 李少稚,馮江敏;乙肝病毒相關性腎炎與人白細胞抗原相關性的探討[J];中國醫(yī)科大學學報;2001年04期

中國重要會議論文全文數據庫 前1條

1 赫東;陳倩;;先兆子癇患者人白細胞抗原-G的變化[A];中華醫(yī)學會第一屆全球華人婦產科學術大會暨第三次全國婦產科中青年醫(yī)師學術會議論文匯編[C];2007年

中國碩士學位論文全文數據庫 前1條

1 戴良成;人白細胞抗原HLA-B*1502等位基因在南方人與北方人中分布頻率分析[D];廣州醫(yī)學院;2009年

本文編號：861963