本文關(guān)鍵詞：構(gòu)建及選育新型結(jié)核病疫苗菌株的實驗研究

  更多相關(guān)文章： 原生質(zhì)體融合 電融合 BCG菌株 H37Ra菌株 融合菌株

【摘要】：目的：以卡介苗（Bacillus Calmette-Guerin vaccine, BCG）菌株(簡稱BCG菌株）和結(jié)核分枝桿菌國際標(biāo)準(zhǔn)無毒株H37Ra菌株(簡稱H37Ra菌株）為親本菌株，制備BCG菌株原生質(zhì)體和H37Ra菌株原生質(zhì)體的融合菌株，并對融合菌株進(jìn)行鑒定、培養(yǎng)。 方法： 1.利用原生質(zhì)體技術(shù)制備BCG菌株原生質(zhì)體和H37Ra菌株原生質(zhì)體，并對制備影響因素中菌齡、酶解濃度、酶解時間進(jìn)行探索，優(yōu)化BCG菌株原生質(zhì)體和H37Ra菌株原生質(zhì)體的制備條件。 2.采用三種不同的的再生培養(yǎng)基分別為再生羅氏固體培養(yǎng)基、再生Sauton固體培養(yǎng)基和再生Sauton液體培養(yǎng)基，對BCG菌株原生質(zhì)體和H37Ra菌株原生質(zhì)體分別進(jìn)行再生培養(yǎng)，優(yōu)化其再生條件。 3.采用熒光染色技術(shù)分別標(biāo)記及鑒定BCG菌株原生質(zhì)體和H37Ra菌株原生質(zhì)體。 4.利用電穿孔技術(shù)對已標(biāo)記的BCG菌株原生質(zhì)體和H37Ra菌株原生質(zhì)體進(jìn)行電融合，制備融合菌株并優(yōu)化制備融合菌株的條件。 5.利用激光共聚焦顯微鏡對電融合后的融合菌株進(jìn)行觀察、鑒定并對融合菌株進(jìn)行再生培養(yǎng)。 結(jié)果： 1.利用原生質(zhì)體技術(shù)成功制備了BCG菌株原生質(zhì)體，在菌齡為18d、酶解濃度為12mg/mL、酶解時間為5h時，是制備BCG原生質(zhì)體的最優(yōu)條件；制備H37Ra菌株原生質(zhì)體的最佳條件：菌齡為21d，酶解濃度為12mg/mL、酶解時間為6h。 2.采用再生羅氏固體培養(yǎng)基、再生Sauton固體培養(yǎng)基和再生Sauton液體培養(yǎng)基分別培養(yǎng)BCG菌株原生質(zhì)和H37Ra菌株原生質(zhì)體，發(fā)現(xiàn)BCG菌株原生質(zhì)體和H37Ra菌株原生質(zhì)體在再生羅氏固體培養(yǎng)基和再生Sauton固體培養(yǎng)基上生長良好，而在再生Sauton液體培養(yǎng)基上幾乎不生長。 3.采用熒光染色技術(shù)分別標(biāo)記BCG菌株原生質(zhì)體和H37Ra菌株原生質(zhì)體：使用FDA染色標(biāo)記BCG菌株原生質(zhì)體，發(fā)現(xiàn)有活性的BCG菌株原生質(zhì)體呈黃綠色熒光；使用羅丹明B染色標(biāo)記H37Ra菌株原生質(zhì)體，發(fā)現(xiàn)有活性的H37Ra菌株原生質(zhì)體呈紅色熒光。 4.利用電穿孔技術(shù)對熒光標(biāo)記的BCG菌株原生質(zhì)體和H37Ra菌株原生質(zhì)體進(jìn)行電融合，最佳的融合條件：融合電壓U=2.2KV，電擊時間t=0.8ms，，同時利用激光共聚焦顯微鏡可觀察到融合效率高、活性好，具有紅綠色熒光的BCG菌株原生質(zhì)體和H37Ra菌株原生質(zhì)體的融合菌株。 5.采用再生羅氏固體培養(yǎng)基對BCG菌株原生質(zhì)體和H37Ra菌株原生質(zhì)體進(jìn)行再生培養(yǎng)，得到活性好、生長良好的融合菌株。 結(jié)論： 1.利用原生質(zhì)體技術(shù)，制備出BCG菌株原生質(zhì)體和H37Ra菌株原生質(zhì)體，并對制備條件進(jìn)行優(yōu)化，同時對BCG菌株原生質(zhì)體和H37Ra菌株原生質(zhì)體的再生條件進(jìn)行優(yōu)化，培養(yǎng)出活性好、生長良好的再生菌株。 2.利用電穿孔技術(shù)，成功獲得BCG菌株原生質(zhì)體和H37Ra菌株原生質(zhì)體的融合菌株；并對融合菌株進(jìn)行再生培養(yǎng)，可得到生長良好的再生菌株。
【關(guān)鍵詞】：原生質(zhì)體融合 電融合 BCG菌株 H37Ra菌株 融合菌株
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 縮略詞表8-9
• 前言9-12
• 材料與方法12-21
• 結(jié)果21-33
• 討論33-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 文獻(xiàn)綜述41-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 致謝52-53
• 作者簡歷53-54
• 導(dǎo)師評閱表54

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 鄭重誼;謝達(dá)平;譚周進(jìn);肖克宇;李雨虹;;影響微生物原生質(zhì)體融合技術(shù)的因素[J];湖南農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年04期

2 霍乃蕊;韓克光;;細(xì)胞融合技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用[J];激光生物學(xué)報;2006年02期

3 宋愛環(huán),李紅葉,劉小紅;指狀青霉(Penicillium digitatum)原生質(zhì)體制備和再生條件[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報;2004年02期

4 王建華,趙學(xué)慧;螯合劑對原生質(zhì)體融合的影響[J];生物工程學(xué)報;1998年01期

5 趙晨;易宗春;榮龍;孫艷;;斜臥青霉原生質(zhì)體制備和再生的研究[J];微生物學(xué)雜志;2009年01期

6 趙春苗;徐春厚;;原生質(zhì)體融合技術(shù)及在微生物育種中的應(yīng)用[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2012年04期

7 張華山;余響華;李亞芳;薛海燕;;酵母屬間融合構(gòu)建直接轉(zhuǎn)化淀粉生產(chǎn)燃料酒精的新型菌株[J];中國釀造;2006年04期

8 張國錦;薛林貴;張寶芹;;微生物原生質(zhì)體技術(shù)及其研究進(jìn)展[J];中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志;2009年05期

本文編號：856271