發(fā)布時(shí)間：2017-09-13 11:14

  本文關(guān)鍵詞：LL-37基因轉(zhuǎn)染對(duì)巨噬細(xì)胞活化及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子表達(dá)的影響

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【摘要】：人源陽(yáng)離子抗菌肽hCAP-18/LL-37作為天然免疫的效應(yīng)分子，不僅具有廣譜的抗感染作用，還具有趨化、中和內(nèi)毒素、促血管生成素等多種生物學(xué)效應(yīng)。近年來(lái)研究證實(shí)抗菌肽LL-37具有強(qiáng)大的固有免疫調(diào)節(jié)功能，并可以通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞的活化參與獲得性免疫應(yīng)答。巨噬細(xì)胞是人體免疫系統(tǒng)的重要細(xì)胞，在機(jī)體天然免疫與適應(yīng)性免疫中都發(fā)揮著重要作用。文獻(xiàn)報(bào)道LL-37可在上皮細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞呈誘導(dǎo)性表達(dá)。然而LL-37在巨噬細(xì)胞的表達(dá)與活化及其機(jī)制研究尚不十分清楚。 本研究通過(guò)建立穩(wěn)定表達(dá)LL-37的小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞模型，研究LL-37基因?qū)奘杉?xì)胞活化功能的影響及活化的相關(guān)分子機(jī)制。為L(zhǎng)L-37的臨床應(yīng)用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 1建立穩(wěn)定表達(dá)LL-37基因的小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞模型 擴(kuò)增真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-C1-LL-37，，經(jīng)轉(zhuǎn)染、篩選和鑒定，得到穩(wěn)定表達(dá)pEGFP-C1-LL-37質(zhì)粒的RAW264.7細(xì)胞（C1LR）以及穩(wěn)定表達(dá)pEGFP-C1質(zhì)粒的RAW264.7細(xì)胞(C1R)，為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。 2LL-37基因轉(zhuǎn)染對(duì)RAW264.7細(xì)胞活化功能的影響 采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性；熒光微球吞噬實(shí)驗(yàn)測(cè)定吞噬功能；NO檢測(cè)試劑盒檢測(cè)NO分泌水平。結(jié)果表明：C1LR細(xì)胞組與細(xì)胞對(duì)照組及C1R細(xì)胞組比較細(xì)胞增殖能力明顯增強(qiáng)；吞噬功能增強(qiáng)；NO分泌水平明顯增多。 3LPS可以促進(jìn)LL-37基因?qū)π∈缶奘杉?xì)胞RAW264.7的活化。 采用LPS刺激RAW264.7、C1LR、C1R細(xì)胞，采用上述方法進(jìn)行活性測(cè)定，結(jié)果顯示，經(jīng)LPS刺激后，C1LR細(xì)胞較C1R細(xì)胞及未經(jīng)LPS刺激C1LR細(xì)胞組比較增殖能力明顯增強(qiáng)；NO分泌水平明顯增多；吞噬功能有所提高。 4LL-37基因?qū)AW264.7細(xì)胞LPS-TLR4介導(dǎo)的信號(hào)通路的影響 探討LL-37基因?qū)AW264.7細(xì)胞活化是否通過(guò)LPS-TLR4信號(hào)通路介導(dǎo)。采用RT-PCR法檢測(cè)TLR4的表達(dá)，結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)LPS刺激的C1LR細(xì)胞TLR4mRNA表達(dá)上調(diào)。繼而，檢測(cè)了LPS-TLR4信號(hào)通路中關(guān)鍵接頭蛋白分子及下游炎性因子的mRNA表達(dá)變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)LPS處理后，C1LR細(xì)胞上MyD88、TRAF-6的mRNA表達(dá)上調(diào)，并且NF-κB表達(dá)轉(zhuǎn)錄入核。TNF-α、IL-1β的mRNA表達(dá)上調(diào)。 本研究結(jié)果提示：LL-37基因可以促進(jìn)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7的活化；LL-37基因可以通過(guò)LPS-TLR4介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與活化巨噬細(xì)胞。為抗菌肽在巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)及其作用機(jī)制與臨床應(yīng)用方面研究奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)并提供了新的科研資料。
【關(guān)鍵詞】：LL-37 基因轉(zhuǎn)染 RAW264.7細(xì)胞 TLR4 NF-κB
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【目錄】：

• 提要4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-14
• 引言14-15
• 文獻(xiàn)綜述15-24
• 1 LL-37 的發(fā)現(xiàn)和免疫生物學(xué)功能15-20
• 1.1 LL-37 的發(fā)現(xiàn)與結(jié)構(gòu)及表達(dá)15-17
• 1.2 LL-37 的免疫生物學(xué)效應(yīng)17-20
• 2 巨噬細(xì)胞的活化類(lèi)型及功能20-21
• 2.1 巨噬細(xì)胞的活化類(lèi)型20
• 2.2 巨噬細(xì)胞的主要生物學(xué)功能20-21
• 3 TLR4 及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路途徑21-24
• 3.1 Toll 樣受體及其表達(dá)21-22
• 3.2 TLR4 及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路22-23
• 3.3 Toll 樣受體與 LL-3723-24
• 課題設(shè)計(jì)思路24-26
• 實(shí)驗(yàn)研究26-56
• 1 材料和方法26-38
• 1.1 細(xì)胞株26
• 1.2 質(zhì)粒26
• 1.3 主要試劑26-27
• 1.4 主要試劑的配制27-29
• 1.5 主要實(shí)驗(yàn)儀器29-30
• 1.6 實(shí)驗(yàn)方法30-38
• 2 結(jié)果38-52
• 2.1 建立穩(wěn)定表達(dá) LL-37 基因的 RAW264.7 細(xì)胞系38-43
• 2.2 LL-37 基因?qū)?RAW264.7 細(xì)胞系活化功能的影響43-45
• 2.3 LPS 對(duì)穩(wěn)定表達(dá) LL-37 的 RAW264.7 細(xì)胞活化功能的影響45-48
• 2.4 LL-37 基因?qū)?RAW264.7 細(xì)胞 LPS-TLR4 信號(hào)通路及其下游信號(hào)分子的表達(dá)影響48-52
• 3 討論52-55
• 3.1 LL-37 基因?qū)奘杉?xì)胞活化的影響53-54
• 3.2 LL-37 基因?qū)?LPS-TLR4 介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞活化及下游信號(hào)分子的表達(dá)變化的影響54-55
• 4 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-64
• 致謝64

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 李棟;程海波;王明艷;李黎;吳勉華;;消癌解毒方加入LPS及CD284對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721的TLRs/NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路影響[J];中華中醫(yī)藥雜志;2012年11期

2 謝志堅(jiān),李磊,熊曉東,張偉,呂鳳林,胡承香,徐祥,溫建良,何萍,元東;創(chuàng)傷后大鼠pMΦ分化表型及吞噬功能的變化[J];免疫學(xué)雜志;2004年01期

3 李丹;任亞娜;范華驊;;巨噬細(xì)胞的分類(lèi)及其調(diào)節(jié)性功能的差異[J];生命科學(xué);2011年03期

4 柏茂樹(shù);伍治平;王熙才;;腫瘤化療輔助中藥研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2010年03期

5 伍宏亮;張青川;;對(duì)TLR4的認(rèn)識(shí)及其與前列腺癌研究進(jìn)展[J];中華全科醫(yī)學(xué);2013年03期

6 尹華華,朱京慈,李磊;巨噬細(xì)胞的異質(zhì)性[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2004年04期

7 宋向鳳;牛杰;劉玉峰;;蝎素組分Ⅲ對(duì)脂多糖刺激人白血病單核細(xì)胞系THP1細(xì)胞TLR4和p65的表達(dá)[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年49期

8 周q

本文編號(hào)：843365