胚胎中腦神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)及分化條件探討
本文關鍵詞:胚胎中腦神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)及分化條件探討
更多相關文章: 神經(jīng)干細胞 細胞培養(yǎng) 分化 白血病抑制因子
【摘要】:目的:探討神經(jīng)干細胞(neural stem cells,NSCs)的培養(yǎng)方法以及各種條件對NSCs生長狀況的影響。方法:取SD大鼠胚胎中腦,在含細胞因子堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)和內皮細胞生長因子(epidermal growth factor,EGF)的無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)擴增,得到的神經(jīng)球用神經(jīng)巢蛋白nestin抗體鑒定和5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxy uridine,Brdu)摻入檢測增殖能力。血清誘導分化后用免疫熒光做星形膠質細胞酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和神經(jīng)元特異性Ⅲ型微管蛋白(neuron-specific classⅢβ-tubulin,β-Ⅲ-tublin)的雙標檢測。研究進一步觀察了細胞因子b FGF和EGF單用及合用對克隆形成數(shù)量的影響及不同接種密度和白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)對細胞生長的影響。結果:神經(jīng)球nestin免疫熒光表達顯示強陽性;Brdu摻入實驗顯示神經(jīng)球細胞具有很好的增殖能力;分化后免疫雙標結果得到了GFAP(68.32±5.70)%和β-Ⅲ-tublin(21.65±3.40)%的陽性表達;當2種因子同時存在時細胞克隆數(shù)量優(yōu)于單因子作用組(P㩳0.05,與EGF組比較;P0.01,與b FGF組比較);與對照組比較LIF作用組細胞數(shù)量明顯增多(F=2 630.114,P=0.000);細胞接種密度對神經(jīng)球的數(shù)量有明顯影響(F=155.100,P=0.001),在(0.5~16.0)×105個/ml密度范圍內,神經(jīng)球數(shù)量隨著接種密度增加而增加。結論:b FGF和EGF 2種細胞因子對NSCs的生長是必須的;長期傳代過程中LIF能促進NSCs的生長;NSCs生長有密度依賴性,但接種密度應該控制在適宜范圍內。
【作者單位】: 重慶醫(yī)科大學干細胞與組織工程研究所干細胞研究平臺;重慶醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院神經(jīng)內科;
【關鍵詞】: 神經(jīng)干細胞 細胞培養(yǎng) 分化 白血病抑制因子
【基金】:國家自然科學基金資助項目(編號:31100985) 重慶市自然科學基金資助項目(編號:cstc2010BB5096)
【分類號】:R321
【正文快照】: 研究證實,在胚胎腦和成年腦內均存在具有自我更新能力和多項分化潛能的神經(jīng)干細胞(neuralstem cells,NSCs)[1],能分化產(chǎn)生神經(jīng)元和神經(jīng)膠質細胞。胚胎期的一部分神經(jīng)干細胞以非增殖的靜態(tài)方式長期存在于神經(jīng)系統(tǒng)中。神經(jīng)干細胞的體外獲取可通過直接從神經(jīng)組織分離培養(yǎng)、其他來
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