本文關(guān)鍵詞：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植前細(xì)胞活性評(píng)價(jià)指標(biāo)的研究

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【摘要】：背景： 人臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical cord derived mesenchymal stemcells, hUC-MSCs）憑借其組織來源廣泛、含量豐富、不受倫理限制等優(yōu)勢(shì)成為間充質(zhì)干細(xì)胞的理想來源,是目前干細(xì)胞移植的熱點(diǎn)。UC-MSCs作為一種動(dòng)態(tài)的活細(xì)胞，移植前細(xì)胞活性對(duì)治療效果的影響最為直接。目前移植前細(xì)胞活性檢測(cè)指標(biāo)通常采用經(jīng)典臺(tái)盼藍(lán)染色法。但是由于易受主觀因素的影響，并且其檢測(cè)針對(duì)的是細(xì)胞膜完整性，僅僅是細(xì)胞生理狀態(tài)的一部分，并不能時(shí)時(shí)地準(zhǔn)確反映細(xì)胞整體功能，從而影響對(duì)臨床應(yīng)用的指導(dǎo)意義。因此，探尋一種可準(zhǔn)確反映細(xì)胞功能狀態(tài)的活性指標(biāo)，將會(huì)大大促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞在臨床疾病治療、科學(xué)研究方面的發(fā)展。 目的： 通過對(duì)多種具有代表性的細(xì)胞活性測(cè)定方法進(jìn)行比較，探尋可準(zhǔn)確反映細(xì)胞功能狀態(tài)的活性指標(biāo)，篩選出一定條件下能夠真實(shí)反映移植前細(xì)胞狀態(tài)的活性指標(biāo)，為UC-MSCs臨床應(yīng)用提供指導(dǎo)。 方法： 1.體外分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，細(xì)胞免疫學(xué)表型鑒定，成骨成脂誘導(dǎo)； 2.UC-MSCs的保存：0.9%氯化鈉注射液，4℃條件下保存0h、2h、4h、6h； 3.評(píng)估人工活性測(cè)定方法（臺(tái)盼藍(lán)法、TUNEL、Live-Dead Assay、貼壁實(shí)驗(yàn)）的準(zhǔn)確性； 4.采用多種具有代表性的細(xì)胞活性測(cè)定方法（臺(tái)盼藍(lán)染色法、Annexin V-PI、TUNEL、CCK-8、Live-Dead Assay、貼壁實(shí)驗(yàn)）檢測(cè)保存后細(xì)胞存活率； 5.對(duì)細(xì)胞存活率與反應(yīng)細(xì)胞功能狀態(tài)指標(biāo)CFE進(jìn)行相關(guān)性分析； 6.對(duì)貼壁實(shí)驗(yàn)在不同觀察者之間的可靠性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 1.針對(duì)0.9%生理鹽水保存不同時(shí)間點(diǎn)（0h、2h、4h、6h）的UC-MSCs進(jìn)行活性檢測(cè)，，人工檢測(cè)方法（臺(tái)盼藍(lán)染色法、TUNEL、Live-Dead Assay、貼壁實(shí)驗(yàn)）之間最大測(cè)量差值大約分別是1.46%、6.89%、8.23%、8.94%，均小于10%的統(tǒng)計(jì)誤差； 2.在UC-MSCs保存0h時(shí)，臺(tái)盼藍(lán)染色法同其它幾種經(jīng)典活性測(cè)定方法（Annexin V-PI、TUNEL、CCK-8、Live-DeadAssay、貼壁實(shí)驗(yàn)）比較，結(jié)果相似，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而對(duì)于保存一定時(shí)間后UC-MSCs，細(xì)胞活力則具有顯著性差異； 3.觀察保存后細(xì)胞存活率與反應(yīng)其功能狀態(tài)指標(biāo)CFE之間的關(guān)聯(lián)程度，采用臺(tái)盼藍(lán)染色法測(cè)得的活細(xì)胞比例與CFE的相關(guān)性為r2=0.893，而其它的檢測(cè)方法（Annexin V-PI、TUNEL、CCK-8、Live-DeadAssay、貼壁實(shí)驗(yàn)）測(cè)得的活細(xì)胞比例與CFE則具有較好的的相關(guān)性（分別為r2=0.935、0.949、0.924、0.947、0.982），其中貼壁實(shí)驗(yàn)的相關(guān)系數(shù)最高； 4.貼壁實(shí)驗(yàn)作為一種人工活性檢測(cè)方法，其結(jié)果的可靠性存在爭(zhēng)議。采用其進(jìn)行活力分析時(shí)，5個(gè)觀察者測(cè)得的活性數(shù)據(jù)不存在顯著性差異，具有較好的一致性。 結(jié)論： 1.采用幾種經(jīng)典測(cè)定方法（臺(tái)盼藍(lán)染色法、Annexin V-PI、TUNEL、CCK-8、Live-Dead Assay、貼壁實(shí)驗(yàn)）檢測(cè)細(xì)胞活力時(shí)，臺(tái)盼藍(lán)染色法適用于即刻細(xì)胞活力的檢測(cè)； 2.對(duì)于經(jīng)過保存之后的細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)法過高的估計(jì)了細(xì)胞功能，其他活性檢測(cè)方法則可以較之相對(duì)精確，而其中貼壁實(shí)驗(yàn)則是目前眾多檢測(cè)細(xì)胞活性方法中相對(duì)較為精確的； 3.觀察者的差異性并不會(huì)影響貼壁實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞移植 細(xì)胞活性 克隆形成率
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 英文縮略詞表12-13
• 前言13-15
• 第一章 材料與方法15-30
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料15-22
• 1.1.1 臍帶來源15
• 1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑15-16
• 1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)耗材16-17
• 1.1.4 主要儀器17-18
• 1.1.5 溶液配制18-22
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法22-30
• 1.2.1 臍帶標(biāo)本的采集22
• 1.2.2 UC-MSCs 的制備22
• 1.2.3 UC-MSCs 的原代、傳代培養(yǎng)及細(xì)胞凍存22-23
• 1.2.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)23-24
• 1.2.5 UC-MSCs 的鑒定24-25
• 1.2.6 UC-MSCs 的保存25
• 1.2.7 保存后 UC-MSCs 活性測(cè)定25-29
• 1.2.8 UC-MSCs 克隆形成能力的檢測(cè)29
• 1.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析29-30
• 第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-43
• 2.1 UC-MSCs 原代培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)情況及光鏡下形態(tài)30
• 2.2 UC-MSCs 鑒定結(jié)果30-34
• 2.3 不同人工活性檢測(cè)方法測(cè)定經(jīng)保存 UC-MSCs 存活率34
• 2.4 不同檢測(cè)方法對(duì) UC-MSC 保存不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)得的細(xì)胞活性比較34-35
• 2.5 不同檢測(cè)方法對(duì)經(jīng)保存 UC-MSCs 活性分析與集落形成率的比較35-42
• 2.6 評(píng)估貼壁實(shí)驗(yàn)的可靠性42-43
• 第三章 討論43-47
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 綜述52-70
• 參考文獻(xiàn)59-70
• 發(fā)表文章70-71
• 致謝71-72
• 個(gè)人簡(jiǎn)介72

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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3 劉陽;賴翼;李敏惠;楊淑霞;鄭靜;陽泰;李麗梅;鄧勇;張強(qiáng);任榮梅;李錢梅;張帥;鄒強(qiáng);李華;;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞存活率的方法學(xué)建立[J];國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2011年15期

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6 王

本文編號(hào)：754180