發(fā)布時間：2017-08-26 12:22

  本文關(guān)鍵詞：大規(guī)模純化脊髓灰質(zhì)炎病毒的蔗糖墊層離心法的建立

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【摘要】：目的建立可大規(guī)模純化脊髓灰質(zhì)炎病毒(poliovirus,PV)的蔗糖墊層離心法。方法病毒大量增殖后,收集病毒液,經(jīng)PEG濃縮、三氟三氯乙烷抽提后,采用蔗糖墊層或Cs Cl密度梯度離心法純化PV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型),電鏡下觀察病毒形態(tài),進(jìn)行核酸及感染性滴度的檢測。將純化的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型PV免疫豚鼠,心臟采血,分離血清,微量中和試驗法檢測血清中和抗體滴度。結(jié)果蔗糖墊層離心法純化的各型PV,病毒顆粒形態(tài)典型,背景清晰,除完整的光滑型病毒顆粒外,還可見大量空心病毒顆粒樣品,純化效果較好;Cs Cl密度梯度離心法純化的PV樣品,病毒形態(tài)也較典型,但完整的病毒顆粒較多。兩種純化方法獲得的病毒基因組核酸特征顯著,背景清晰,無明顯差異。蔗糖墊層離心法純化的各型PV的感染性滴度及免疫后豚鼠血清中和抗體滴度均高于Cs Cl密度梯度離心法。結(jié)論蔗糖墊層離心法純化的PV純度高,免疫原性好,可用于大規(guī)模純化PV或其他病毒。
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所;云南民族大學(xué);
【關(guān)鍵詞】： 脊髓灰質(zhì)炎病毒 蔗糖墊層 純化
【基金】：云南省自然科學(xué)基金項目(2013FZ130,2012FD039)
【分類號】：R392
【正文快照】： 大規(guī)模純化病毒的方法除了經(jīng)典的蔗糖密度梯度離心法和Cs Cl密度梯度離心法外,還有膠體硅密度梯度離心法(colloidal silica gradient)、簡單的離子交換層析法、尺寸排阻層析法[1-2]以及Monoliths整體層析柱法[3-4]等。這些方法因費時、成本高、操作繁瑣等,在實際運用中具有一

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本文編號：741476