本文關(guān)鍵詞：基于報告基因的抗CD20單克隆抗體ADCC生物學(xué)活性測定方法的建立

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【摘要】：利用Jurkat/NFAT-luc+FcγRIIIa轉(zhuǎn)基因細胞系作為效應(yīng)細胞,WIL2-S細胞系作為靶細胞,通過熒光素酶檢測系統(tǒng)(Bio GloTM Luciferase Assay System)進行抗CD20單抗的ADCC生物學(xué)活性檢測,并對實驗條件進行優(yōu)化及方法學(xué)驗證。結(jié)果顯示抗CD20單抗在該方法中存在量效關(guān)系,且符合四參數(shù)方程式:y=(A-D)/[1+(X/C)B]+D。方法經(jīng)優(yōu)化確定靶細胞為WIL2-S細胞,抗體稀釋濃度為18 000 ng·m L-1,1∶5倍的稀釋倍數(shù),效靶比為6∶1,誘導(dǎo)時間為6 h。該方法具有良好的專屬性,8次獨立實驗的回歸分析、線性及平行性均通過統(tǒng)計學(xué)檢驗;4個不同稀釋組回收率樣本經(jīng)3次測定,相對效價分別為(44.39±3.93)%、(72.74±2.78)%、(128.28±7.01)%和(168.19±2.70)%,變異系數(shù)均小于10%,對應(yīng)回收率分別為(88.78±7.85)%、(96.99±3.70)%、(102.63±5.61)%和(112.12±1.80)%。本研究利用轉(zhuǎn)基因細胞法成功建立抗CD20單抗ADCC生物學(xué)活性檢測方法,該方法專屬性強、重復(fù)性好,準(zhǔn)確性高,可作為抗CD20單抗ADCC生物學(xué)活性的常規(guī)檢測方法。
【作者單位】： 中國食品藥品檢定研究院;
【關(guān)鍵詞】： 抗CD單克隆抗體 ADCC 生物學(xué)活性
【基金】：國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項資助項目(2014ZX09304311-001,2012ZX09304010) 中國食品藥品檢定研究院中青年發(fā)展研究基金資助項目(2012B6)
【分類號】：R392
【正文快照】： (National Institutes for Food and Drug Control,Beijing 100050,China)1為本文的共同第一作者.CD20抗原是分子量為35 k D的非糖基化跨膜蛋白,CD20作為B細胞表面特有的分化抗原,在95%以上的B細胞淋巴瘤細胞膜上高密度表達,而在造血干細胞、血漿細胞和其他正常組織中不表達,

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本文編號：730002