本文關鍵詞：Tet-on慢病毒系統(tǒng)表達弓形蟲ROP18的研究

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【摘要】：目的用Tet-on慢病毒載體系統(tǒng)構建穩(wěn)定表達弓形蟲棒狀體蛋白18(ROP18)的293T細胞株。方法PCR擴增ROP18基因序列插入慢病毒載體p LVCT-t TR-KRAB中,構建帶有ROP18活性片段的慢病毒載體p LVCT-t TRKRAB-ROP18。經鑒定后將該重組載體(6μg)與輔助質粒ps PAX2(4μg)和p MD2.G(2μg)共同轉染293T細胞,熒光顯微鏡下觀察細胞熒光。于轉染后48和72 h收集含有慢病毒顆粒上清液,感染293T細胞。以1μg/ml強力霉素(DOX)誘導293T細胞表達ROP18,熒光顯微鏡下觀察細胞熒光,RT-PCR法檢測293T細胞中的ROP18表達情況。結果 PCR擴增rop18片段為960 bp,與預期大小一致。經PCR和酶切鑒定重組慢病素載體構建成功。轉染48 h后,293T細胞于熒光顯微鏡下可見綠色熒光。經DOX誘導24 h即可觀察到293T細胞中明亮綠色熒光。RT-PCR檢測結果顯示,293T細胞ROP18可產生960 bp特異條帶,與預期結果一致。結論采用Tet-on慢病毒載體系統(tǒng)構建了穩(wěn)定表達弓形蟲ROP18的293T細胞株。
【作者單位】： 江蘇大學醫(yī)學院;中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所 衛(wèi)生部寄生蟲病原與媒介生物學重點實驗室 世界衛(wèi)生組織瘧疾、血吸蟲病和絲蟲病合作中心;
【關鍵詞】： 剛地弓形蟲 棒狀體蛋白 慢病毒 四環(huán)素誘導調控表達系統(tǒng)
【基金】：國家自然科學青年基金(No.81301453) 衛(wèi)生部寄生蟲病原與媒介生物學重點實驗室開放課題(No.WSBKTKT201302) 中國博士后科學基金(No.2014M561598) 江蘇省博士后科研資助計劃(No.1402171C) 江蘇大學高級人才啟動基金(No.13JDG023,13JDG127)~~
【分類號】：R382.5
【正文快照】： (1 School of Medicine,Jiangsu University,Zhenjiang 212013,China;2 National Institute of ParasiticDiseases,Chinese Center for Disease Control and Prevention;Key Laboratory of Parasite and Vector Biology,MOH;WHO Collaborating Centre for Malaria,Schistosomi

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據庫 前4條

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【共引文獻】

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本文編號：729523