本文關鍵詞：Ankyrin-B基因“死亡”結(jié)構域突變在4型QT間期延長綜合征中的作用及其機制研究

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【摘要】：QT間期延長綜合征(LQTS)是以心電圖QT間期延長為主要特征的一種遺傳性心律失常。其主要原因是心臟的延遲復極�；颊咭壮霈F(xiàn)陣發(fā)性的尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動過速(TDP)、心室纖顫,甚至導致暈厥和猝死。而且,具有家族性遺傳基因的年輕人常因此而出現(xiàn)心源性休克,其病死率較高。 目前研究表明,LQTS根據(jù)病因及發(fā)病機制可分為LQT1-12及JLN1-2共14種。LQT4的發(fā)病機制與發(fā)生在染色體4q25-27上的ankyrin-B基因突變導致該基因編碼的ankyrin-B蛋白(ANKB)出現(xiàn)功能異常直接相關。ANKB是心血管系統(tǒng)中離子通道和轉(zhuǎn)運蛋白信號復合物的關鍵部位,結(jié)構上可以分為膜結(jié)合結(jié)構域、血影結(jié)合結(jié)構域、羧基端結(jié)構域和“死亡”結(jié)構域,而羧基端結(jié)構域和“死亡”結(jié)構域又合稱為調(diào)節(jié)結(jié)構域。研究表明,1型Na+-Ca2+交換器(NCX1)、 Na+-K+-ATP酶α1/α2(Na+/K+ATP α1/α2)和三磷酸肌醇受體(IP3R)是ANKB的結(jié)合蛋白,ankyrin-B基因突變所致的功能障礙是導致室性心動過速,甚至猝死以及病竇綜合征等一系列復雜的心電紊亂表型的主要原因。近來,大量的動物模型研究還發(fā)現(xiàn),ANKB在維持正常心功能中發(fā)揮著極其重要的作用。迄今為止,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的ankyrin-B基因堿基點突變絕大多數(shù)發(fā)生在該基因羧基端結(jié)構域和血影蛋白結(jié)合結(jié)構域,而“死亡”結(jié)構域的點突變鮮有報道。本課題前期臨床研究發(fā)現(xiàn)一例LQT4患者,其ankyrin-B基因的點突變位于“死亡”結(jié)構域(第40號外顯子)的第4603號堿基突變,即胸腺嘧啶取代了腺嘌呤(T4603A),導致第1535號氨基酸發(fā)生改變,即精氨酸取代了色氨酸(W1535R),作為調(diào)節(jié)結(jié)構域組成部分的“死亡”結(jié)構域點突變導致LQT4的發(fā)生機制尚不清楚。因此,在本研究旨在于探討ankyrin-B基因“死亡”結(jié)構域點突變(ANKB-W1535R)導致LQT4的分子生物學機制。 本實驗分三部分。第一部分：確定心肌組織腺病毒在體轉(zhuǎn)染方法的有效性。實驗分為陰性對照組(group Ⅰ)、心肌多點注射組(group Ⅱ)、傳統(tǒng)冠脈灌注組(group Ⅲ)和停搏后冠脈灌注組(group Ⅳ)。按照上述各方法轉(zhuǎn)染后,觀察各組轉(zhuǎn)染效率的差異,并通過組織學方法觀察心肌組織形態(tài)改變,Western blot法檢測各組心外組織(肝、腎、肺)中腺病毒的表達量,以及停搏后冠脈灌注組心肌組織中腺病毒表達量隨時間變化的關系。 第二部分：在大體水平探討轉(zhuǎn)染ankyrin-B基因“死亡”結(jié)構域點突變(ANKB-W1535R)對大鼠心電及相關蛋白表達的影響。實驗分為陰性對照組(control)、轉(zhuǎn)染Ad-EGFP組(EGFP組)和轉(zhuǎn)染Ad-EGFP-ANKB-W1535R (ANKB-W1535R組)。運用停搏后冠脈灌注法建立大鼠LQT4模型,觀察ANKB-W1535R對大鼠心電圖的影響；Western blot方法檢測ANKB-W1535R對大鼠心肌組織的ANKB蛋白及其結(jié)合蛋白Na+/K+ATPα1/α2、NCX1和IP3R蛋白表達量的影響。 第三部分：在細胞水平研究轉(zhuǎn)染ankyrin-B基因“死亡”結(jié)構域點突變(ANKB-W1535R)對大鼠心肌細胞Ca2+瞬變及相關蛋白表達和定位的影響。急性分離大鼠心肌細胞,實驗分為陰性對照組(control)、轉(zhuǎn)染Ad-EGFP組(EGFP組)和轉(zhuǎn)染Ad-EGFP-ANKB W1535R (ANKB-W1535R組),并通過細胞免疫熒光方法觀察ANKB-W1535R對心肌細胞ANKB蛋白及其結(jié)合蛋白Na+/K+ATPα1/α2、 NCX1和IP3R蛋白表達量及定位的影響。 結(jié)果 第一部分：確定心肌組織腺病毒在體轉(zhuǎn)染方法的有效性 (一)各組大鼠心肌組織EGFP熒光強度及轉(zhuǎn)染效率的比較 熒光顯微鏡下陰性對照組心肌組織可見微弱的自發(fā)熒光。轉(zhuǎn)染各組4日后大鼠心肌組織均有明顯的綠色熒光,其中心肌多點注射組熒光分布不均,傳統(tǒng)冠脈灌注組僅有點片狀熒光,停搏后冠脈灌注組熒光均勻分布。傳統(tǒng)冠脈灌注組轉(zhuǎn)染效率最低(5.29±4.9%),分別與心肌多點注射組(61.9±9.7%)和停搏后冠脈灌注組(52.9±7.4%)相比差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),而心肌多點注射組與停搏后冠脈灌注組的轉(zhuǎn)染效率相比差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 (二)各組EGFP在左心室表達量的比較 采用Western Blot分析各組EGFP在左心室的表達量,心肌多點注射組及停搏后冠脈灌注組的EGFP表達量顯著強于傳統(tǒng)冠脈灌注組(P0.01),而心肌多點注射組及停搏后冠脈灌注組差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 (三)各組大鼠心臟及心外組織(腎臟、肝臟、肝臟)中EGFP表達量的比較 采用Western Blot分析各組EGFP在大鼠腎臟、肺臟、心臟及肝臟的表達量,心肌多點注射組和停搏后冠脈灌注組心臟的EGFP表達量顯著高于腎、肺和肝的EGFP表達量(P0.01)；而傳統(tǒng)冠脈灌注組的肝臟的EGFP表達量則顯著高于心、腎和肺的EGFP表達量(P0.05),但心臟的EGFP表達量與腎和肺的EGFP表達量差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 (四)停搏后冠脈灌注組各不同時間點EGFP表達量的比較 停搏后冠脈灌注組的EGFP表達量隨時間的延長而明顯減弱。與陰性對照組相比,轉(zhuǎn)染后4d組EGFP表達量顯著增高(2.484±0.315,P0.01)；與轉(zhuǎn)染4d組相比,轉(zhuǎn)染7d(0.234±0.040)、10d(0.132±0.038)及14d組(0.045±0.008)EGFP表達量明顯降低,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01)；而與陰性對照組相比,轉(zhuǎn)染后10、14d的EGFP表達量差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 (五)不同轉(zhuǎn)染方法對大鼠心肌組織形態(tài)結(jié)構的影響比較 陰性對照組心肌細胞形態(tài)良好,結(jié)構完整,橫紋清晰；心肌多點注射組心肌組織呈現(xiàn)大量炎性細胞浸潤,且有部分心肌壞死；傳統(tǒng)冠脈灌注組及停搏后冠脈灌注組心肌細胞形態(tài)良好,心肌組織結(jié)構完整,無炎性細胞浸潤。 第二部分：在大體水平探討ANKB-W1535R時大鼠心電及相關蛋白表達量的影響 (一)轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R對大鼠心電圖的影響 1、轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R對大鼠心電圖形態(tài)的影響 轉(zhuǎn)染4d后,各組大鼠檢測心電圖,心電圖形態(tài)均無顯著變化。ANKB-W1535R組的1只大鼠在運動后心電圖出現(xiàn)了偶發(fā)的心臟逸搏。腹腔注射腎上腺素模擬大鼠應激后,三組大鼠均無死亡。EGFP組在運動后心率加快,心電圖形態(tài)無改變,而ANKB-W1535R組中3只大鼠在運動后心率加快(占42.9%),4只心率變異性高(占57.1%)。運動加應激后ANKB-W1535R組4只大鼠在應激5-15min后均出現(xiàn)了多形性室性心動過速,而陰性對照組及EGFP組大鼠在運動加應激后只出現(xiàn)心率增快,未出現(xiàn)心電圖形態(tài)的變化。 轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R對大鼠心電圖QT間期(QTc)的影響：不同處理組之間心電圖QTc差異有統(tǒng)計學意義(F=7.769, P=0.004)。ANKB-W1535R組QTc最高(206.99±32.70)ms。采用LSD兩兩比較可見,ANKB-W1535R組與陰性對照組(155.17±13.96)和EGFP組(168.83±21.91)相比,QTc差異有統(tǒng)計學意義(P值分別為0.002,0.014)；而陰性對照組與EGFP組相比,QTc差異無統(tǒng)計學意義(P=0.353)。 轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R對大鼠心電圖PR、QRS間期及P波的影響：不同處理組之間PR、QRS間期及P波差異均無統(tǒng)計學意義(F值分別為0.674,2.031,0.257；P值分別為0.524,0.164,0.777)。 2、轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R對大鼠心率的影響 運動加應激后,不同處理組之間心率差異無統(tǒng)計學意義(F=0.619,P=0.551)。ANKB-W1535R組大鼠在應激后25min內(nèi)心率顯示高度的變異性,心率最高時達586BPM,最低時只有248.62BPM。陰性對照組和EGFP組大鼠心率隨時間的變化不大,陰性對照組心率在394BPM至430BPM之間變化,EGFP組心率在381BPM至478BPM之間變化。 綜上所述,轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R可以導致大鼠QTc延長、偶發(fā)心臟逸搏,應激后心率變異性增高、出現(xiàn)多形性室性心動過速,而這些均符合人類LQT4的心電圖特點,因此,我們判斷轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R建立LQT4模型成功。 (二) Western blot測定ANKB、Na+/K+ATP α1/α2、NCX1和IP3R蛋白表達水平 1、轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R對大鼠心肌組織ANKB表達量的影響：不同處理組之間ANKB表達量差異有統(tǒng)計學意義(F=6.382, P=0.033)。ANKB-W1535R組大鼠的ANKB蛋白表達水平最低(0.489±0.091),分別與陰性對照組(0.793±0.139)及EGFP組(0.764±0.110)相比差異有統(tǒng)計學意義(P值分別為0.018、0.026)；陰性對照組與EGFP組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.766)。因此,轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R能導致ANKB表達量減少。 2、轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R對大鼠心肌組織Na+/K+ATPase α1表達量的影響：不同處理組之間Na+/K+ATPase α1表達量差異有統(tǒng)計學意義(F=13.875, P=0.006)。ANKB-W1535R組大鼠的Na+/K+ATPase α1蛋白表達水平最低(0.620±0.119),分別與陰性對照組(1.291±0.193)及EGFP組(1.031±0.151)相比差異有統(tǒng)計學意義(P值分別為0.002、0.019)；陰性對照組與EGFP組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.090)。因此,轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R能導致Na+/K+ATPα1表達量減少。 3、轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R對大鼠心肌組織Na+/K+ATPase α2表達量的影響：不同處理組之間Na+/K+ATPase α2表達量差異有統(tǒng)計學意義(F=5.665,P=0.042). ANKB-W1535R組大鼠的Na+/K+ATPase α1蛋白表達水平最低(0.101±0.021),分別與陰性對照組(0.196±0.040)及EGFP組(0.201±0.055)相比差異有統(tǒng)計學意義(P值分別為0.030、0.024);陰性對照組與EGFP組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.883)。因此,轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R能導致Na+/K+ATPa2表達量減少。 4、ANKB-W1535R對大鼠心肌組織NCX1表達量的影響：不同處理組之間NCX1表達量差異有統(tǒng)計學意義(F=7.033, P=0.027). ANKB-W1535R組大鼠的NCX1蛋白表達水平最低(0.370±0.151),分別與陰性對照組(0.741±0.141)及EGFP組(0.694±0.098)相比差異有統(tǒng)計學意義(P值分別為0.014、0.024)；陰性對照組與EGFP組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.682)。因此,轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R能導致NCX1表達量減少。 5、轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R對大鼠心肌組織IP3R表達量的影響：不同處理組之間IP3R表達量差異有統(tǒng)計學意義(F=6.511, P=0.031). ANKB-W1535R組大鼠的IP3R蛋白表達水平最低(0.530±0.125),分別與陰性對照組(1.037±0.188)及EGFP組(0.960±0.228)相比差異有統(tǒng)計學意義(P值分別為0.015、0.030)；陰性對照組與EGFP組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.629)。因此,轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R能導致IP3R表達量減少。 第三部分：在細胞水平探討轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R對大鼠心肌細胞Ca2+瞬變及相關蛋白表達和定位的影響 (一)心肌細胞重組腺病毒載體的轉(zhuǎn)染效率 急性分離的心肌細胞成活率可達80%以上。在心肌細胞用重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染48h后,細胞存活率達70%以上,轉(zhuǎn)染效率約為100%。 (二)心肌細胞ANKB、Na+/K+ATP α1/α2、NCX1及IP3R的免疫熒光染色 1、ANKB免疫熒光染色結(jié)果：陰性對照組和EGFP組心肌細胞的ANKB沿細胞橫管(T管)區(qū)域呈條形分布,熒光清晰明亮。而ANKB-W1535R組ANKB分布紊亂,熒光強度最弱(29.441±4.474),分別與陰性對照組(52.425±7.619)及EGFP組(48.762±6.573)相比有顯著差異(P值分別為0.004、0.010)；陰性對照組與EGFP組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.507)。 2、Na+/K+ATP α1免疫熒光染色結(jié)果：陰性對照組和EGFP組心肌細胞的Na+/7K+ATP α1在細胞膜及橫管(T管)區(qū)域均有染色,熒光清晰明亮。而ANKB-W1535R組Na+/K+ATP α1分布紊亂,熒光強度最弱(16.110±3.640),分別與陰性對照組(42.083±1.637)及EGFP組(44.363±7.345)相比有顯著差異(P值分別為0.008、0.006)；陰性對照組與EGFP組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.746)。 3. Na+/K+ATP α2免疫熒光染色結(jié)果：陰性對照組和EGFP組心肌細胞的Na+/K+ATP α2沿細胞橫管(T管)區(qū)域呈條形分布,熒光清晰明亮。而ANKB-W1535R組Na+/K+ATPα2分布紊亂,熒光強度最弱(23.191±2.997),分別與陰性對照組(42.029±7.672)及EGFP組(45.202±8.269)相比有顯著差異(P值分別為0.007、0.014)；陰性對照組與EGFP組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.585)。 4、NCX1免疫熒光染色結(jié)果：陰性對照組和EGFP組心肌細胞的NCX1沿細胞橫管(T管)區(qū)域呈條形分布,熒光清晰明亮。而ANKB-W1535R組NCX1分布紊亂,熒光強度最弱(10.219±3.330),分別與陰性對照組(42.582±7.197)及EGFP組(39.483±5.372)相比有顯著差異(P值分別為0.000、0.001)；陰性對照組與EGFP組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.518)。 5、IP3R免疫熒光染色結(jié)果：陰性對照組和EGFP組心肌細胞的IP3R沿細胞橫管(T管)區(qū)域呈條形分布,熒光清晰明亮。而ANKB-W1535R組IP3R分布紊亂,熒光強度最弱(12.386±3.862),分別與陰性對照組(40.514±5.659)及EGFP組(40.509±9.610)相比有顯著差異(P值均為0.002)；陰性對照組與EGFP組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.999)。 綜上所述,轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R能導致ANKB及其結(jié)合蛋白Na+/K+ATP α1/α2、NCX1及IP3R表達量減少,并減弱這些蛋白在橫管靶向定位功能。 (三)心肌細胞Ca2+瞬變 不同處理組心肌細胞的收縮性(場刺激引起細胞長度縮短的最大值與收縮前長度的比值)：陰性對照組為(9.21±1.23)%,EGFP組為(9.20±1.50)%,ANKB-W1535R組為(8.97±0.99)%,各組相比差異無統(tǒng)計學意義(F=1.348,P=0.261),說明心肌細胞的收縮性并未受影響；ANKB-W1535R組Ca2+瞬變峰值(ΔF/F0)最高(1.43±0.14),與陰性對照組(1.03±0.19)和EGFP組(0.98±0.21)相比,差異有統(tǒng)計學意義(P值分別為0.036,0.023)；不同處理組的Ca2+瞬變上升時間(rise time)差異無統(tǒng)計學意義(F=1.384,P=0.252)；不同處理組的Ca2+瞬變半數(shù)衰減時間(FDHM)差異顯著(F=79.19,P=0.000),與陰性對照組(129.87±11.91ms)及EGFP組為(126.59±13.77ms)相比,ANKB-W1535R組(153.64±23.40ms)的FDHM最高(P值均為0.000),說明Ca2+回收機制受損。 結(jié)論 1、改良過的停搏后冠脈灌注法應用于轉(zhuǎn)染大鼠心肌細胞,具備較高轉(zhuǎn)染效率、轉(zhuǎn)染分布均勻、心外組織轉(zhuǎn)染量少、存活率較高及對心肌組織無損害等特點,可作為大鼠心肌細胞在體轉(zhuǎn)染的一種較好的可選方法； 2、在大體水平上,轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R可以引起大鼠LQT4心律失常,ANKB-W1535R引起ANKB、Na+/K+ATPα1/α2、NCX1及IP3R蛋白表達量下降及定位紊亂可能是導致LQT4大鼠心律失常的原因之一； 3、在細胞水平上,細胞內(nèi)Ca2+瞬變增高可能是LQT4大鼠心律失常的原因之一。
【關鍵詞】：4型QT間期延長綜合征 B型錨定蛋白 腺病毒 鈉鉀ATP酶α_1/α_2 1型鈉鈣交換體 1 4 5—三磷酸肌醇受體
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要3-11
• ABSTRACT11-21
• 前言21-27
• 實驗方法27-33
• 一、實驗動物及材料27
• 二、主要試劑的配制27-31
• 三、實驗儀器31-33
• 第一部分 確定心肌組織腺病毒在體轉(zhuǎn)染方法的有效性33-42
• 一、實驗方法33-36
• 二、實驗結(jié)果36-40
• 三、討論40-42
• 第二部分 轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R對大鼠心電及相關蛋白表達量的影響42-61
• 一、實驗方法42-43
• 二、結(jié)果43-57
• 三、討論57-61
• 第三部分 轉(zhuǎn)染ANKB-W1535R對大鼠心肌細胞Ca~(2+)瞬變的影響61-77
• 一、實驗方法61-63
• 二、實驗結(jié)果63-74
• 三、討論74-77
• 結(jié)論77-78
• 參考文獻78-84
• 中英文縮寫詞表84-85
• 致謝85-87

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8 李剛;邰付菊;駱娟;鄭勇;李學寶;;兩個新的棉花基因在NaCl脅迫下的表達調(diào)控分析[A];基因開啟未來：新時代的遺傳學與科技進步——湖北省遺傳學會第八次代表大會暨學術討論會論文摘要匯編[C];2009年

9 賈衛(wèi);金伯泉;張新海;楊琨;朱勇;劉雪松;李琦;;CD226(PTA1)分子D1結(jié)構域參與NK和CTL的功能[A];中國免疫學會第四屆學術大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

10 李祥;張家海;曹贊霞;吳季輝;施蘊渝;;GOPC蛋白PDZ結(jié)構域的溶液結(jié)構及其與Neuroligin羧基末端的相互作用[A];第十次中國生物物理學術大會論文摘要集[C];2006年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 醫(yī)學院;顏寧研究組在《自然》發(fā)文[N];新清華;2011年

2 吳一福;四軍醫(yī)大首次發(fā)現(xiàn)人腦抑癌新基因[N];中國醫(yī)藥報;2005年

3 記者　彭德倩;我科學家發(fā)現(xiàn)谷類“大個子”基因[N];解放日報;2006年

4 白毅;我國重大疾病相關基因及蛋白功能轉(zhuǎn)化研究獲進展[N];中國醫(yī)藥報;2008年

5 北京德寶群興科貿(mào)有限公司 劉曉凱;營養(yǎng)因素對動物體脂肪沉積的影響及調(diào)控機理[N];中國畜牧報;2004年

6 記者 項錚;單抗可能成為靶向性強的腫瘤藥物[N];科技日報;2005年

7 胡建和 陳永耀 王自良 謝慶閣;新型豬瘟疫苗的研究和應用前景[N];中國畜牧報;2005年

8 本版編輯;血友病：“玻璃人”疾病[N];中國醫(yī)藥報;2006年

9 莊新茂;新型豬瘟疫苗的研究和應用前景[N];中國畜牧報;2005年

10 ;海南醫(yī)學院及附屬醫(yī)院碩果累累[N];科技日報;2002年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 于紅陽;鞘氨醇激酶-1的乙�；揎椉霸谔悄虿》乐沃械淖饔醚芯縖D];天津大學;2012年

2 張明香;STAT4、STAT6與CBP相互作用及其關鍵結(jié)構域的檢測[D];重慶醫(yī)科大學;2010年

3 吳益民;三個含SCAN結(jié)構域的鋅指蛋白基因ZNF191、ZNF396和ZNF397研究[D];復旦大學;2002年

4 何華偉;肌酸激酶結(jié)構域相互作用與活性中心極性微環(huán)境的研究[D];清華大學;2007年

5 周曉麗;蛋白質(zhì)結(jié)構域重組構建新功能酶[D];吉林大學;2012年

6 唐寧;p52SHC1和p52SHC3對神經(jīng)元、神經(jīng)干細胞和PC12細胞周期的影響研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2010年

7 高鵬;特異性介導DNA轉(zhuǎn)導的多結(jié)構域嵌合蛋白的構建、表達及鑒定[D];吉林大學;2011年

8 劉奕彤;Ccd1激活Wnt信號通路的分子機制[D];清華大學;2010年

9 郭秉楠;可溶性鈣網(wǎng)蛋白片段39-272對中國倉鼠卵巢細胞體內(nèi)成瘤性的影響及其機制研究[D];蘇州大學;2013年

10 解軍;MPP穿膜結(jié)構域的結(jié)構模擬、特征分析及MPP介導的轉(zhuǎn)基因載體體系的構建和轉(zhuǎn)導研究[D];山西醫(yī)科大學;2003年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陸云云;Ankyrin-B基因“死亡”結(jié)構域突變在4型QT間期延長綜合征中的作用及其機制研究[D];南方醫(yī)科大學;2013年

2 陳娜;HCV NS3絲氨酸蛋白酶抑制劑高通量篩選模型的建立[D];吉林大學;2010年

3 劉雷;Bcr啟動子驅(qū)動EGFP表達轉(zhuǎn)基因小鼠的制備和初步鑒定[D];揚州大學;2010年

4 嚴國權;芯片探針雜交效率的影響因素分析[D];浙江理工大學;2010年

5 王付龍;NF-κB反應性d2EGFP報告系統(tǒng)的建立與應用[D];第三軍醫(yī)大學;2002年

6 趙麗靜;VEGF164與EGFP雙基因共表達的優(yōu)化新型HIV-1慢病毒載體的構建及表達[D];吉林大學;2011年

7 左廣鋒;辣椒平對人超極化激活的環(huán)核苷酸門控通道亞型2（hHCN2）和亞型4（hHCN4）的影響[D];南京醫(yī)科大學;2011年

8 陳中湘;反義RNA對丙型肝炎病毒基因表達的抑制作用研究[D];中南大學;2010年

9 周楊;重組人酸性成纖維細胞生長因子乳腺特異表達載體的構建及其功能的驗證[D];吉林大學;2011年

10 楊廷;L-periaxin蛋白核輸出機制的初步分析[D];山西大學;2013年

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本文編號：725881