本文關鍵詞：粉塵螨第24組過敏原cDNA克隆表達及其免疫學特性的研究

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【摘要】：目的克隆表達粉塵螨第24組過敏原cDNA,研究其免疫學特性,為深入研究塵螨致敏機制提供基礎。方法以粉塵螨cDNA文庫為模板,根據(jù)Der f24基因序列(GenBank Accession No.KC669700)設計引物,PCR擴增Der f24cDNA,構建原核表達載體pET-His-Derf24,并經(jīng)酶切鑒定和DNA測序,轉化至E.coli BL21(DE3)plysS,用異丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)誘導表達;重組產(chǎn)物經(jīng)Ni 2+螯合層析純化,獲得重組的Der f24(14kDa);對重組蛋白進行IgE-Western blotting(WB)實驗和IgE-ELISA實驗;通過Swiss-model軟件模擬Der f24的3D結構并通過DNAStar軟件分析其潛在的B細胞表位,合成三個肽(位置分別為75-88aa、44-57aa和104-117aa)進行IgE-ELISA實驗。結果克隆的Der f24基因cDNA序列全長為357bp,編碼118個氨基酸(GenBank Accession No.KP064571);Der f24原核表達主要形式為不可溶的包涵體,純化后的重組Der f24蛋白分子量約為14kDa。IgE-WB結果顯示,重組Der f24與10例粉塵螨過敏患者血清呈強陽性反應,而與10例健康對照組均為陰性。IgE-ELISA結果顯示,合成表位肽(No.1 75-88aa:Z=5.6734、No.2 44-57aa:Z=5.6720和No.3 104-117aa:Z=5.6791;P0.0001)均與22例粉塵螨過敏患者血清呈陽性反應,而與22例健康對照組血清呈陰性反應。結論本研究成功克隆表達了Der f24cDNA,重組Der f24可結合粉塵螨過敏血清IgE,鑒定了3個潛在的IgE B細胞表位。本研究為進一步防治螨性過敏性疾病奠定了技術基礎。
【作者單位】： 深圳大學醫(yī)學院過敏反應與免疫學研究所;深圳市過敏反應與免疫學重點實驗室;深圳大學第一附屬醫(yī)院;
【關鍵詞】： 粉塵螨 Der f cDNA克隆 過敏原性 B細胞表位
【基金】：國家自然科學基金(No.31328014,No.31400786) 廣東省科技計劃(No.2013B03180002) 深圳市科技計劃(No.JCYJ20130326112225593)聯(lián)合資助~~
【分類號】：R392
【正文快照】： Fund:Supported by the National Natural Science Foundation of China((No.31328014and No.31400786),the Science andTechnology Foundation of Guangdong Province(No.2013B03180002)and the Science and Technology Foundation of ShenzhenCity(No.JCYJ20130326112225593

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 滕飛翔;俞黎黎;卞勇華;孫金霞;張承伯;王楠;楊李;崔玉寶;;塵螨變應原Der f 6、Der p 6和Blo t 6結構的比較研究[J];基因組學與應用生物學;2014年04期

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

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【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王少圣;劉文艷;李朝品;陳文魁;;粉塵螨的培養(yǎng)實驗[J];醫(yī)學理論與實踐;2007年06期

2 陳子慶;粉塵螨制劑的制備[J];江蘇醫(yī)藥;1982年06期

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本文編號：711613