本文關(guān)鍵詞：血小板衍生生長因子C腺病毒載體的構(gòu)建及在內(nèi)皮祖細胞中的表達

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【摘要】：目的：構(gòu)建含大鼠血小板衍生生長因子C（PDGF-C）基因的pAD-EGFP-PDGF-C的重組腺病毒表達載體，體外轉(zhuǎn)染骨髓源性內(nèi)皮祖細胞（EPCs）并觀察目的基因蛋白及mRNA表達。 方法：通過RT-PCR法從pIRES2-EGFP-PDGF-C真核表達載體中獲得PDGF-C目的片段，經(jīng)BP重組插入中間載體pDONR221，，再經(jīng)過LR重組到pAd/CMV/V5-DEST，構(gòu)建pAd-PDGF-C-IRES2-EGFP腺病毒載體。酶切及DNA測序鑒定后轉(zhuǎn)染HEK293A包裝、純化，測定病毒滴度后轉(zhuǎn)染大鼠骨髓源性EPCs，應(yīng)用Real-time qPCR、Western blot等方法檢測PDGF-C蛋白及mRNA的表達。 結(jié)果：核酸內(nèi)切酶消化及PCR分析證實PDGF-C基因成功插入pAD/CMV/V5-DEST腺病毒載體，轉(zhuǎn)染后熒光顯微鏡下觀察可見綠色熒光蛋白表達,轉(zhuǎn)染48h后Real-time qPCR測定EPCs中PDGF-C含量明顯提高（P0.05），Wester blot檢測證實在46kD存在特異性條帶。 結(jié)論：成功構(gòu)建了大鼠PDGF-C基因的腺病毒表達載體pAD-EGFP-PDGF-C，體外轉(zhuǎn)染大鼠骨髓源性EPCs能高效表達目的基因產(chǎn)物，為后續(xù)研究PDGF-C基因功能以及進一步開展基因治療奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：血小板衍生生長因子C 腺病毒載體 內(nèi)皮祖細胞 轉(zhuǎn)染
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R3416
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-11
• 1 材料與方法11-18
• 1.1 材料與儀器11-12
• 1.2 實驗過程與方法12-17
• 1.3 統(tǒng)計學(xué)方法17-18
• 2 結(jié)果18-20
• 3 討論20-23
• 總結(jié)23-24
• 參考文獻24-26
• 附圖、附表26-30
• 文獻綜述30-42
• 參考文獻37-42
• 致謝42-43
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的文章43-44

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號：703103