本文關(guān)鍵詞：miR-144通過靶向Atg4a調(diào)控卡介苗和雷帕霉素誘導(dǎo)的RAW264.7細胞自噬

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【摘要】：目的研究卡介苗(BCG)對RAW264.7細胞中與細胞自噬相關(guān)的miRNA(miR-21、miR-181a、miR-155和miR-144)表達的影響,并以miR-144為研究對象,驗證miR-144對自噬相關(guān)基因Atg4a的靶向調(diào)控關(guān)系,探究其在結(jié)核分枝桿菌感染宿主細胞過程中調(diào)控細胞自噬途徑的作用機制。方法分別對RAW264.7巨噬細胞進行饑餓處理12 h、50 ng/m L雷帕霉素作用2 h、10 nmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用12 h;BCG刺激RAW264.7巨噬細胞12 h、24 h、48 h后,收集細胞,提取總RNA;利用實時定量PCR(qRT-PCR)檢測miR-21、miR-181a、miR-155及miR-144的表達水平;構(gòu)建p MIR-Report-Atg4a及p MIR-ReportAtg4a mut重組質(zhì)粒,利用雙螢光素酶報告系統(tǒng)、qRT-PCR及Western blot法驗證miR-144與Atg4a的靶向作用關(guān)系。結(jié)果 BCG刺激RAW264.7巨噬細胞后,可使miR-21、miR-155及miR-144表達上調(diào),miR-181a表達下調(diào);經(jīng)雷帕霉素誘導(dǎo)的細胞自噬,4種miRNA表達量與正常組相比分別上調(diào)約64倍、52倍、14倍、1倍;與正常組相比,3-MA處理細胞組,miR-21、miR-144、miR-155、miR-181a的表達量分別下調(diào)1.22倍、1.05倍、1.54倍及12.5倍;雙螢光素酶報告系統(tǒng)及Western blot法證實,miR-144可靶向作用于Atg4a-3'UTR并抑制其表達。結(jié)論 miR-144可靶向抑制自噬相關(guān)基因Atg4a的表達,參與調(diào)控RAW264.7巨噬細胞的自噬過程。
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學(xué)檢驗學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： miR- 結(jié)核分枝桿菌 細胞自噬 靶向調(diào)控
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31160494) 教育部“新世紀優(yōu)秀人才支持計劃”項目(NCET 11-11023)
【分類號】：R392
【正文快照】： 微小RNA(microRNA,miRNA)是一類長度約19~24個核苷酸的內(nèi)源性非編碼RNA分子,主要通過形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RNA-inducedsilencing complex,RISC)與靶mRNA 3'端非翻譯區(qū)(3'-untranslated region,3'UTR)互補結(jié)合,誘導(dǎo)或抑制靶mRNA的翻譯[1],并實現(xiàn)基因在轉(zhuǎn)錄水平后的調(diào)控。已

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【共引文獻】

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3 徐t，

本文編號：682800