發(fā)布時間：2017-08-13 11:05

  本文關(guān)鍵詞：腸道病毒71型疫苗免疫應答機制研究

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【摘要】：目前對大多數(shù)疫苗的保護機制缺乏了解，新型疫苗的研發(fā)設(shè)計仍停留在依靠“經(jīng)驗”階段，導致疫苗研發(fā)時間長且成本高。近年來系統(tǒng)疫苗學概念的提出，為疫苗學發(fā)展開辟了新的思路。腸道病毒71型（EV71）疫苗是我國自主研發(fā)的新型疫苗，目前中國大陸3個廠家已完成的III期臨床試驗，結(jié)果顯示疫苗具有較好的安全性和保護效果，疫苗對EV71感染所致手足口病的保護率達90%以上，對EV71感染所引起相關(guān)疾病的保護率在80%以上。EV71疫苗為我國領(lǐng)先研發(fā)的創(chuàng)新型疫苗，了解該疫苗的免疫機制對促進EV71疫苗研發(fā)具有重要意義。本研究目的是探討EV71疫苗誘導機體免疫應答機制，為EV71疫苗研發(fā)和應用提供理論基礎(chǔ)。 為了探討疫苗免疫應答的共同機制，運用薈萃分析（Meta分析）方法，分析自NCBI GEO數(shù)據(jù)庫和ArrayExpress數(shù)據(jù)庫中下載的疫苗免疫基因芯片表達譜數(shù)據(jù)，分別探討疫苗免疫機體后固有免疫和獲得性免疫在轉(zhuǎn)錄水平上共同的基因和通路，并應用EV71疫苗免疫人群樣本采用RT-PCR方法進行驗證。結(jié)果表明疫苗誘導固有免疫共同基因和通路為IFN-I相關(guān)的基因和通路；疫苗誘導獲得性免疫共同基因主要為EEF1A1、IL-18，通路為B細胞和T細胞受體信號激活通路。 在Meta分析的基礎(chǔ)上，為揭示EV71疫苗的免疫機制，采用基因芯片和蛋白芯片技術(shù)探討EV71疫苗免疫機制，獲得了EV71疫苗免疫人群應答的轉(zhuǎn)錄組譜和蛋白組譜。固有免疫應答轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果表明，IFN-I信號通路在EV71疫苗誘導的固有免疫應答中發(fā)揮重要作用，應用小鼠及基因缺陷小鼠模型驗證該信號通路結(jié)果顯示，EV71疫苗誘導固有免疫應答中存在一條TLR4→IRF9→IFN-I→Jak-STAT→免疫細胞活化調(diào)控通路�；蚺c中和抗體水平關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果表明ELL2與中和抗體水平關(guān)聯(lián)性較高，提示該基因有可能作為預測中和抗體應答的標志物。獲得性免疫應答轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果表明，差異表達基因主要參與細胞因子-細胞因子相互作用、細胞粘附作用、抗原加工和提呈作用等通路；基因與中和抗體的關(guān)聯(lián)性分析表明MX1和MX2與抗體持久性應答的關(guān)聯(lián)性較高，有可能作為免疫持久性預測水平的標志物。對20個基因應用RT-PCR方法進行驗證，結(jié)果顯示芯片檢測結(jié)果可靠。應用蛋白芯片檢測獲得EV71疫苗獲得性免疫應答的蛋白組譜，差異表達上調(diào)蛋白主要為炎癥反應蛋白、趨化因子、干擾素相關(guān)蛋白和細胞間粘附分子；差異表達下調(diào)蛋白主要為免疫調(diào)節(jié)分子和炎癥前因子。蛋白因子與中和抗體水平關(guān)聯(lián)性分析得到ICAM-1和IP-10與中和抗體水平具有較高的相關(guān)性，，提示ICAM-1和IP-10分別有可能作為預測中和抗體應答和免疫持久性的指標。 本研究通過Meta分析，研究疫苗誘導固有免疫和獲得性免疫應答的共同機制，通過設(shè)計疫苗免疫人群和動物實驗，獲得EV71疫苗免疫應答的轉(zhuǎn)錄組和蛋白組譜，研究結(jié)果為闡明EV71疫苗應答機制以及篩選免疫原性預測的標志物提供了依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：Meta分析 免疫機制 系統(tǒng)疫苗學 EV71
【學位授予單位】：中國食品藥品檢定研究院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 主要中英文縮略詞4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-10
• 一、應用 Meta 分析篩選疫苗免疫人體誘導的共同基因和通路10-41
• 1. 材料與方法10-23
• 1.1 疫苗固有免疫機制研究10-22
• 1.1.1 試劑與材料10-11
• 1.1.2 試劑配制11-12
• 1.1.3 儀器12-13
• 1.1.4 方法13-22
• 1.1.4.1 Meta 分析研究樣本來源13
• 1.1.4.2 數(shù)據(jù)預處理13
• 1.1.4.3 單個樣本數(shù)據(jù)合并13
• 1.1.4.4 數(shù)據(jù)處理和分析13-14
• 1.1.4.5 DEG 功能富集14
• 1.1.4.6 單個數(shù)據(jù)集分析14
• 1.1.4.7 免疫后 3 和 7d 亞組分析14
• 1.1.4.8 Meta 分析結(jié)果驗證實驗14-22
• 1.2 疫苗獲得性免疫機制研究22-23
• 1.2.1 Meta 分析研究樣本來源22
• 1.2.2 數(shù)據(jù)預處理22
• 1.2.3 單個樣本數(shù)據(jù)合并22
• 1.2.4 篩選疫苗免疫機體的共同 DEG22
• 1.2.5 DEG 的通路富集22-23
• 2. 結(jié)果23-38
• 2.1 疫苗固有免疫應答機制研究23-35
• 2.1.1 Meta 分析入組樣本23-24
• 2.1.2 疫苗誘導機體早期免疫應答 DEG 篩選24-25
• 2.1.3 功能分析25-26
• 2.1.4 單個數(shù)據(jù)集分析26-29
• 2.1.5 針對不同時間點的亞組分析29-32
• 2.1.6 Meta分析獲得的DEG驗證實驗32-35
• 2.2 疫苗獲得性免疫應答機制研究35-38
• 2.2.1 Meta 分析入組樣本35
• 2.2.2 單個數(shù)據(jù)集數(shù)據(jù)分析35-36
• 2.2.3 共同 DEG 的篩選36
• 2.2.4 共同 DEG 通路富集分析36-38
• 3. 討論38-40
• 4. 小結(jié)40-41
• 二、腸道病毒 71 型疫苗免疫機制研究41-73
• 1.材料與方法41-51
• 1.1 樣本信息41-42
• 1.1.1 人群樣本41
• 1.1.2 動物樣本41-42
• 1.2 試劑與材料42-43
• 1.3 試劑配制43
• 1.3.1 1640 完全培養(yǎng)基43
• 1.3.2 中和抗體檢測所用試劑43
• 1.4 儀器43
• 1.5 方法43-51
• 1.5.1 技術(shù)路線43-44
• 1.5.2 中和抗體檢測44-45
• 1.5.3 基因芯片檢測45-50
• 1.5.4 蛋白芯片檢測50-51
• 1.5.5 流式細胞檢測51
• 1.5.6 統(tǒng)計學方法51
• 2. 結(jié)果51-70
• 2.1 中和抗體檢測51-53
• 2.2 轉(zhuǎn)錄組研究53-69
• 2.2.1 疫苗誘導固有免疫應答轉(zhuǎn)錄組譜53-56
• 2.2.2 固有免疫應答通路小鼠實驗56-58
• 2.2.3 流式細胞檢測58-59
• 2.2.4 固有免疫應答轉(zhuǎn)錄組與中和抗體水平關(guān)聯(lián)分析59-60
• 2.2.5 疫苗誘導獲得性免疫應答轉(zhuǎn)錄組譜60-62
• 2.2.6 獲得性免疫應答轉(zhuǎn)錄組與中和抗體水平關(guān)聯(lián)分析62-64
• 2.2.7 固有免疫應答與獲得性免疫應答轉(zhuǎn)錄組譜的比較64
• 2.2.8 EV71 抗原特異性免疫機制研究64-66
• 2.2.9 鋁佐劑免疫機制研究66-67
• 2.2.10 RT-PCR 驗證67-69
• 2.3 蛋白組研究69-70
• 2.3.1 疫苗誘導獲得性免疫應答蛋白組譜69-70
• 2.3.2 蛋白組與中和抗體水平關(guān)聯(lián)分析70
• 3. 討論70-72
• 4. 小結(jié)72-73
• 總結(jié)73-74
• 參考文獻74-77
• 綜述 177-82
• 參考文獻79-82
• 綜述 282-89
• 參考文獻85-89
• 碩士期間獲獎及發(fā)表的文章89-90
• 致謝90-91

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張軍楠;吳星;石大偉;毛群穎;姚昕;高帆;王一平;徐苗;梁爭論;;應用Meta分析篩選疫苗免疫人體誘導的獲得性免疫基因和通路[J];中國病毒病雜志;2013年05期

本文編號：666938