本文關(guān)鍵詞：人單核細(xì)胞系中HIV-1前病毒轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)新型研究模型的建立

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【摘要】：【目的】抗反轉(zhuǎn)錄病毒療法(ART)能夠有效控制人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus-1,HIV-1)的復(fù)制,但是不能將其完全清除。至2012年底,全球仍有3 500萬HIV-1感染者,同年約160萬人死于艾滋病(Acquired immune deficiency syndrome,AIDS)及其相關(guān)疾病。HIV-1感染難以根治的主要原因之一是機(jī)體內(nèi)HIV-1潛伏儲存庫(Reservoir)的存在。HIV-1潛伏儲存庫主要由CD4+T細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞構(gòu)成,與CD4+T細(xì)胞相比,目前研究者對單核巨噬系細(xì)胞中HIV-1病毒復(fù)制機(jī)制尚不明了,且缺乏適宜的研究體系。因此,為探討單核細(xì)胞活化或分化信號對HIV-1復(fù)制的影響,我們建立了旨在研究HIV-1前病毒轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的人單核巨噬細(xì)胞系模型。【方法】構(gòu)建env區(qū)域移碼突變和nef區(qū)域攜帶EGFP或Nano Luc報告基因的HIV-1 NLn GFP-Kp或NLn Nano Luc-Kp重組病毒,分別感染2種人單核細(xì)胞系THP-1或U937細(xì)胞。通過有限稀釋法制備單克隆細(xì)胞系,利用流式細(xì)胞術(shù)或Nano Luc熒光素酶活性分析檢測報告基因的表達(dá)。篩選EGFP或Nano Luc陰性表達(dá)的細(xì)胞克隆,經(jīng)激活劑佛波酯(Phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)刺激后鑒定潛伏感染的細(xì)胞克隆。【結(jié)果】研究中鑒定了4個HIV-1潛伏感染的細(xì)胞克隆。其中2個是表達(dá)EGFP的THP-1克隆,2個是以Nano Luc為報告基因的U937克隆。這些克隆在PMA刺激處理后皆有報告基因的表達(dá),而在恒態(tài)條件下未檢測到報告基因的表達(dá)。【結(jié)論】成功建立了4個HIV-1潛伏感染的人單核細(xì)胞系克隆,該模型有助于理解單核巨噬系細(xì)胞的HIV-1病毒復(fù)制機(jī)制,可能成為進(jìn)一步研究HIV-1前病毒轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的有力工具。
【作者單位】： 安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;中國科學(xué)院微生物研究所中日聯(lián)合實驗室;Research
【關(guān)鍵詞】： 人免疫缺陷病毒 前病毒 轉(zhuǎn)錄調(diào)控 單核巨噬細(xì)胞 細(xì)胞模型 再活化
【基金】：日本文部科學(xué)省“新生與再生傳染性疾病研究基地項目”(No.10005010)
【分類號】：R373;R3416
【正文快照】： 研究報告人單核細(xì)胞系中HIV-1前病毒轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)新型研究模型的建立李陽1,2谷麗君2,3張宇2劉文軍4嚴(yán)景華4高福4巖本a吉2,5合田仁2,3石田尚臣2,3*(1.安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院安徽合肥230601)(2.中國科學(xué)院微生物研究所中日聯(lián)合實驗室北京100101)(3.Research Center for Asian Infect

【相似文獻(xiàn)】

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2 朱瑩;HMBA和Prostratin激活HIV-1轉(zhuǎn)錄機(jī)制研究[D];廈門大學(xué);2009年

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本文編號：642399