發(fā)布時(shí)間：2017-08-07 17:05

  本文關(guān)鍵詞：半相合基因效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞治療宮頸癌的小鼠模型研究

  更多相關(guān)文章： 半相合基因 效應(yīng)性T細(xì)胞 宮頸癌 STAT3 P-STAT3 TGF-β1 IFN-γ

【摘要】：目的：本實(shí)驗(yàn)以小鼠宮頸癌U14細(xì)胞接種C57BL/6雌鼠，建立小鼠宮頸癌移植瘤模型。體外培養(yǎng)C57BL/6雌鼠及半相合基因鼠CB6F1（BABL/C×C57BL/6的雜交子一代，雌性）來(lái)源的效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞，作用于荷瘤C57BL/6雌鼠，檢測(cè)其對(duì)小鼠瘤組織中的STAT3、P-STAT3、TGF-β_1、IFN-γ表達(dá)的影響，觀察各組小鼠生存期、GVHR的嚴(yán)重程度。 探討同源基因或半相合基因效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞過(guò)繼免疫治療的抗瘤效果，為臨床宮頸癌的治療提供新思路。 方法： 1體外培養(yǎng)小鼠宮頸癌U14細(xì)胞，建立C57BL/6小鼠宮頸癌移植瘤模型。 2腫瘤抗原致敏的成熟DC制備：將C57BL/6、CB6F1小鼠骨髓細(xì)胞，體外加入rmGM-CSF、rmIL-4、腫瘤抗原裂解液，LPS誘導(dǎo)培養(yǎng)即可得到腫瘤抗原致敏的成熟DC。流式細(xì)胞儀分析其CD11c~+、MHC II~+、CD86~+細(xì)胞表面分子表達(dá)情況。 3效應(yīng)性T細(xì)胞的制備：將C57BL/6、CB6F1小鼠脾細(xì)胞，經(jīng)淋巴分離液分離獲得淋巴細(xì)胞，尼龍毛柱吸附法收集T淋巴細(xì)胞。培養(yǎng)T淋巴細(xì)胞2天后，加入腫瘤抗原致敏的成熟DC，培養(yǎng)5天，即可得到效應(yīng)性T細(xì)胞。 4LDH法效應(yīng)性T細(xì)胞體外殺傷實(shí)驗(yàn):將C57BL/6、CB6F1效應(yīng)性T細(xì)胞與宮頸癌U14細(xì)胞以50:1、25:1比例混合，混合8小時(shí)后，酶標(biāo)儀檢測(cè)培養(yǎng)液上清中LDH含量，計(jì)算效應(yīng)性T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷率。 5實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及治療：將荷瘤小鼠C57BL/6完全隨機(jī)分至3組，每組8只。PBS組（A組）：0.5ml PBS鼠尾靜脈注射，每5天1次，共注射3次；同源基因效應(yīng)性T細(xì)胞組（B組）：1×10~6個(gè)/0.5ml C57BL/6來(lái)源效應(yīng)性T細(xì)胞鼠尾靜脈注射，每5天1次，共注射3次；半相合基因效應(yīng)性T細(xì)胞組（C組）：1×10~6個(gè)/0.5ml CB6F1來(lái)源效應(yīng)性T細(xì)胞鼠尾靜脈注射，每5天1次，共注射3次。觀察各組小鼠生存期。 6免疫組化SP法檢測(cè)荷瘤小鼠C57BL/6腫瘤組織STAT3、P-STAT3、TGF-β_1、IFN-γ表達(dá)情況，采用圖像分析軟件對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行分析，用陽(yáng)性細(xì)胞百分比表示其含量。 7HE染色觀察各組小鼠瘤組織壞死情況、肝及小腸的病理改變。 結(jié)果： 1背部皮下接種1×10~6U14細(xì)胞的C57BL/6小鼠，約7天后肉眼可見(jiàn)接種部位腫塊直徑達(dá)0.5cm。 2腫瘤抗原致敏的成熟DC：細(xì)胞培養(yǎng)7天后,大部分懸浮生長(zhǎng)，，成簇明顯，細(xì)胞表面可見(jiàn)毛刺狀突起。流式細(xì)胞儀分析其CD11c~+MHC II~+細(xì)胞純度為92.4%，CD11c~+CD86~+細(xì)胞純度為88.8%。 3LDH法效應(yīng)性T細(xì)胞體外殺傷實(shí)驗(yàn)：效靶比為50:1條件下C57BL/6、CB6F1效應(yīng)性T細(xì)胞對(duì)U14細(xì)胞殺傷率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；效靶比25:1條件下C57BL/6、CB6F1效應(yīng)性T細(xì)胞對(duì)U14細(xì)胞殺傷率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 4各組老鼠生存期：A組B組、A組C組小鼠生存期差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），B組C組小鼠生存期差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 5C57BL/6小鼠瘤組織免疫組化結(jié)果：A組和C組小鼠相比，瘤組織中STAT3、P-STAT3、TGF-β_1、IFN-γ表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。A組和B組小鼠相比，瘤組織中P-STAT3、TGF-β_1表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；瘤組織中STAT3、IFN-γ表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。B組和C組小鼠相比，瘤組織中P-STAT3、TGF-β_1、IFN-γ表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；瘤組織中STAT3表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 6HE染色結(jié)果：HE染色觀察各種小鼠瘤組織，B組和C組小鼠瘤組織較A組小鼠瘤組織壞死面積大。各組小鼠肝及小腸未見(jiàn)明顯病理變化。 結(jié)論： 1在體外實(shí)驗(yàn)中，CB6F1來(lái)源的效應(yīng)性T細(xì)胞與C57BL/6來(lái)源的效應(yīng)性T細(xì)胞都能夠殺傷小鼠宮頸癌U14細(xì)胞，且兩者殺傷率未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2C57BL/6來(lái)源的效應(yīng)性T細(xì)胞過(guò)繼免疫治療，拮抗TGF-β_1表達(dá)，P-STAT3低表達(dá)。 3CB6F1來(lái)源的效應(yīng)性T細(xì)胞過(guò)繼免疫治療，除拮抗TGF-β_1表達(dá)、P-STAT3低表達(dá)外，STAT3低表達(dá)、IFN-γ高表達(dá)。 4C57BL/6、CB6F1來(lái)源的效應(yīng)性T細(xì)胞作用于荷瘤C57BL/6小鼠未見(jiàn)明顯GVHR。 5CB6F1來(lái)源的效應(yīng)性T細(xì)胞過(guò)繼免疫治療與C57BL/6來(lái)源的效應(yīng)性T細(xì)胞過(guò)繼免疫治療都能夠延長(zhǎng)荷瘤C57BL/6小鼠的生存期，且兩者生存期未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
【關(guān)鍵詞】：半相合基因 效應(yīng)性T細(xì)胞 宮頸癌 STAT3 P-STAT3 TGF-β1 IFN-γ
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R-332;R737.33
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10
• 材料與方法10-17
• 結(jié)果17-18
• 附圖18-27
• 附表27-28
• 討論28-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-34
• 綜述 腫瘤免疫療法34-44
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 致謝44-45
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷45

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王其京;王慧;潘科;;自體CIK、DC-CIK與半合子DC-CIK抗腫瘤免疫反應(yīng)的比較研究(英文)[J];癌癥;2010年07期

2 史蓉華;王昕;趙樹銘;;DC瘤苗激活的T淋巴細(xì)胞對(duì)胃癌細(xì)胞的殺傷效應(yīng)研究[J];中國(guó)輸血雜志;2010年02期

3 劉婷;華川;;樹突狀細(xì)胞抗腫瘤免疫的研究進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2009年16期

4 王薇;楊先達(dá);;樹突細(xì)胞源腫瘤疫苗[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2008年08期

5 陳曉丹;宋鑫;;腫瘤-樹突狀細(xì)胞融合疫苗研究進(jìn)展[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2010年09期

6 龐雄昊;周昕熙;陳敏山;;樹突狀細(xì)胞抗腫瘤疫苗的基礎(chǔ)及臨床研究現(xiàn)狀[J];中山大學(xué)研究生學(xué)刊(自然科學(xué)、醫(yī)學(xué)版);2007年02期

7 王峻;蒲驍麟;劉福銀;樊衛(wèi)飛;孟麗娟;楊民;許林;;樹突狀細(xì)胞瘤苗對(duì)自體肺癌細(xì)胞的殺傷作用[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2008年01期

8 馬明瑛;譚曉華;;RNA修飾樹突狀細(xì)胞腫瘤疫苗的研究進(jìn)展[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2012年03期

9 ;In-vitro activation of cytotoxic T lymphocytes by fusion of mouse hepatocellular carcinoma cells and lymphotactin gene-modified dendritic cells[J];World Journal of Gastroenterology;2007年44期

10 馮鐘煦;劉劍勇;;樹突狀細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2012年20期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 王薇;納米材料在抗腫瘤免疫治療中的應(yīng)用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

2 黃凌;非小細(xì)胞肺癌患者M(jìn)AGE-A3基因多態(tài)性/突變及其mRNA表達(dá)水平的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

3 邸軍;慢病毒載體介導(dǎo)人IL-12基因修飾樹突狀細(xì)胞體外抗肺癌作用的研究[D];吉林大學(xué);2009年

4 郭大偉;樹突狀細(xì)胞在肝癌免疫治療中的應(yīng)用研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2009年

5 王雷;白細(xì)胞介素27基因轉(zhuǎn)染食管癌患者樹突狀細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)及其機(jī)理研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 陳曉丹;肺癌細(xì)胞與DC融合的特異性腫瘤疫苗治療肺癌的研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

2 張志武;CD80-pIRES-SART3真核表達(dá)載體的構(gòu)建[D];華中科技大學(xué);2011年

3 劉婷;Rho家族C-末端肽對(duì)樹突狀細(xì)胞交叉遞呈的影響及其機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

4 馮鐘煦;全細(xì)胞抗原致敏DC表型變化在其激活TIL抗肝癌活性的意義研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號(hào)：635729