本文關鍵詞：實驗性牙周炎大鼠模型及miR-23a慢病毒轉染大鼠成骨細胞的建立

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【摘要】：在各種頜骨、牙周、根尖周慢性炎癥中，病灶區(qū)都會形成病理性的骨吸收，其中尤以牙周炎癥骨吸收最為嚴重廣泛。牙周病是一種影響牙齒支持組織的感染性疾病，表現(xiàn)出廣泛的臨床、微生物和免疫學臨床特征，并與多層面的特異性感染因子、宿主免疫反應、環(huán)境因素及遺傳易感性等因素的動態(tài)交聯(lián)反應相關。牙周治療的理想目標是牙周再生，即“完全的牙周結構與功能性再生”。 MicroRNA分子在1993年由Lee等首先發(fā)現(xiàn)存在于線蟲細胞內，繼而被證實廣泛存在于動、植物體內，是真核細胞中一類非編碼調節(jié)性RNA，成熟的microRNAs通過識別并結合靶向互補mRNA3`非翻譯端，遏阻蛋白翻譯和或調節(jié)mRNA的穩(wěn)定性，發(fā)揮廣泛的生物學作用，參與生物體的生長、發(fā)育、免疫防御、衰老、疾病等的過程，被認為是先前生理與疾病研究中所缺失的環(huán)節(jié)。Lee等通過基因芯片技術篩選出了正常與炎癥牙周組織中的差異表達MicroRNAs；Zhou等發(fā)現(xiàn)miR-18a等可促進牙周膜來源干細胞的骨向分化，而miR-23a參與調節(jié)成骨細胞的分化；Liu等人的研究發(fā)現(xiàn)MicroRNAs可持續(xù)調節(jié)炎癥環(huán)境中牙周膜來源干細胞的生物學特性。 現(xiàn)在人們對炎癥骨吸收機制的認識并不完全，其中MicroRNAs是否起了作用？如果MicroRNAs在炎癥環(huán)境中調控骨改建，那么又是如何發(fā)揮作用的呢？ 實驗目的 1觀察大鼠實驗性牙周模型中牙周炎癥環(huán)境中骨吸收的的發(fā)生、發(fā)展及自愈情況，為后期動物體內移植提供實驗基礎。 2建立下調和過表達miR-23a的大鼠成骨細胞，為后期體內移植做準備。 實驗內容 1采用結扎上頜右側第一磨牙的方法，誘導大鼠實驗性牙周炎的發(fā)生，32只雄性SD大鼠（第四軍醫(yī)大學動物中心）（200g±50g）隨機分為4組：結扎7天組；結扎28天組；結扎28天后繼續(xù)喂養(yǎng)7；結扎28天繼續(xù)喂養(yǎng)28天；實驗結束后取頜骨-牙體-牙周聯(lián)合樣本，做micro-CT掃描，用于作三維影像重建測量；脫鈣后石蠟包埋切片，用于HE染色、OPG免疫組織化學染色、TRAP染色，觀察牙周炎癥和骨質吸收情況。 2選用新生SD大鼠籽鼠顱骨，II型膠原酶聯(lián)合EDTA消化，改良組織塊法培養(yǎng)成骨細胞，取傳代第一代及第二代生長期細胞，經由ALP、茜素紅染色鑒定，MTT測其增殖率；慢病毒構建工作由上海吉凱基因化學技術服務公司完成，將獲得的慢病毒載體轉染成骨細胞，通過共聚焦顯微鏡觀察轉染結果并照相，并計算MOI值。 實驗結果 1（1）結扎7天組牙齦組織內炎癥浸潤，牙槽骨表面有破骨細胞生成，牙槽骨高度和根分叉下骨密度值稍下降，但與正常對照相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；（2）結扎21天組炎癥范圍擴大，牙槽骨表面排列有大量破骨細胞，牙槽骨高度和骨密度值下降明顯，與正常對照相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；（3）結扎21天后去結扎7天組炎癥減輕，但仍有大量破骨細胞排列于牙槽骨表面，牙槽骨吸收情況緩解，骨密度值稍上升，但與結扎21天組相比，，差異并無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；（4）結扎21天后去結扎21組牙周組織基本恢復正常，偶見破骨細胞，牙槽骨高度和骨值密度值明顯增加，與結扎21天組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 2ALP、茜素紅染色鑒定結果顯示所培養(yǎng)細胞具有成骨礦化能力，為成骨細胞樣細胞；共聚焦圖片顯示慢病毒轉染成功，且可持續(xù)表達。 結論 1利用結扎法可成功誘發(fā)大鼠牙周炎，去除結扎絲后，牙周炎癥得到控制，牙周組織的再生修復能力啟動，牙周骨質再生。 2成功分離、培養(yǎng)并建立慢病毒轉染的大鼠成骨細胞，miR-23a-up和MiR-23a-down慢病毒體系在轉染的成骨細胞及其傳代后的成骨細胞中均可持續(xù)表達。
【關鍵詞】：實驗性牙周炎 動物模型 骨吸收 miR-23a 成骨細胞
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R781.42;R-332
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-13
• 文獻回顧13-23
• 實驗一 大鼠實驗性牙周炎模型的建立23-31
• 1 材料23
• 2 方法23-24
• 3 結果24-29
• 4 討論29-31
• 實驗二 MIR-23A慢病毒轉染大鼠成骨細胞的建立31-35
• 1 材料31
• 2 方法31-32
• 3 結果32-34
• 4 討論34-35
• 小結35-37
• 參考文獻37-44
• 個人簡歷和研究成果44-45
• 致謝45

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 孫嘉方;荊得寶;劉海江;李fE;王麗琴;王小平;;氯化鑭對大鼠實驗性牙周炎的治療作用[J];實用口腔醫(yī)學雜志;2011年06期

2 程玨;李霞;孫克勤;任娟;王翔宇;;不同方法構建大鼠實驗性牙周炎模型的研究[J];中國藥物與臨床;2007年09期

本文編號：594748