本文關(guān)鍵詞：小鼠皮膚無綠藻感染差異表達(dá)基因的篩選

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【摘要】：第一部分：小鼠皮膚無綠藻感染動物模型的構(gòu)建 目的：構(gòu)建小鼠皮膚無綠藻感染模型。 方法：BALB/C小鼠分為4組,A組為免疫抑制小鼠,腹部皮下接種1x109孢子數(shù)/ml中型無綠藻波多黎各變種懸液組；B組為免疫抑制小鼠,腹部皮下接種1x106孢子數(shù)/ml懸液組：C組為健康小鼠,腹部皮下接種1x109孢子數(shù)/ml懸液組；D組為對照組,健康小鼠腹部皮下接種生理鹽水溶液,每個部位接種量均為200μl。接種后第7、14、28天時觀察各組小鼠腹部皮損變化,并進(jìn)行腹部皮膚病理及真菌檢查。 結(jié)果：A、B、C組小鼠接種處均出現(xiàn)丘疹、膿腫,部分出現(xiàn)潰瘍、結(jié)痂,感染率均為100%。A、B、C三組小鼠的腹部皮損直徑,組內(nèi)相比,均在第7天時最大(P0.05),分別為(6.75±1.09) mm、(5.88±1.17) mm和(5.96+0.99)mm;組間相比,在接種后第7、14天時,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),在第28天時,A組最大(P0.05)為(4.38±0.86)mm。實(shí)驗(yàn)組基本病理改變?yōu)閴乃�、膿腫、肉芽腫形成,HE染色和PAS染色均可見孢子,皮損直接鏡檢可見孢子,培養(yǎng)為無綠藻生長。對照組未感染無綠藻。 結(jié)論：腹部皮下接種法可在免疫抑制和健康小鼠成功建立皮膚無綠藻病動物感染模型。 第二部分：小鼠皮膚無綠藻感染差異表達(dá)基因的篩選 目的：利用基因表達(dá)譜芯片篩選小鼠感染無綠藻皮膚組織的差異表達(dá)基因,探討這些基因在皮膚無綠藻病中的作用,從而對皮膚無綠藻病有更新的認(rèn)識。 方法：分別提取免疫抑制小鼠感染無綠藻的皮膚組織和對照組皮膚組織,抽提總RNA,反轉(zhuǎn)錄成cDNA同時進(jìn)行單色標(biāo)記,和小鼠全基因組表達(dá)譜芯片雜交,經(jīng)過芯片掃描和數(shù)據(jù)處理,分析出差異表達(dá)的基因,并對部分差異基因采用實(shí)時熒光定量PCR的方法進(jìn)行驗(yàn)證。 結(jié)果：感染無綠藻的小鼠皮膚組織中表達(dá)差異2倍的基因共有9902個,其中表達(dá)上調(diào)的基因4974個,表達(dá)下調(diào)的基因4928個。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),差異基因功能主要涉及炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞粘附等多個生物學(xué)過程。另外還發(fā)現(xiàn)了一些有意義的信號通路如趨化因子信號通路、Jak-STAT信號傳導(dǎo)途徑、Toll樣受體信號傳導(dǎo)途徑等。差異基因的實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果與基因芯片的結(jié)果趨勢一致。 結(jié)論：皮膚無綠藻病的發(fā)生涉及眾多基因表達(dá)的改變,芯片技術(shù)可以有效地篩選出皮膚無綠藻感染小鼠的差異表達(dá)基因,對進(jìn)一步探索皮膚無綠藻病的發(fā)病機(jī)制,有效干預(yù)或治療皮膚無綠藻病具有重要意義。
【關(guān)鍵詞】：無綠藻屬 疾病模型 基因芯片 差異表達(dá) 基因 皮膚組織
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R756;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 第一部分 小鼠皮膚無綠藻感染動物模型的構(gòu)建10-19
• 材料與方法10-13
• 結(jié)果13-18
• 討論18-19
• 第二部分 小鼠皮膚無綠藻感染差異表達(dá)基因的篩選19-40
• 材料和方法19-28
• 結(jié)果28-37
• 討論37-40
• 全文小結(jié)40-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 綜述44-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 附錄51-52
• 致謝52-53

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 駱瑜;熊瑋;楊純玉;梁旭;;血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的關(guān)系[J];海南醫(yī)學(xué);2011年03期

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本文編號：578861