本文關鍵詞：去乙�；窼irT1參與AIF介導的細胞凋亡

  更多相關文章： AIF SirT1 去乙�；� 蛋白純化 凝膠阻滯

【摘要】：凋亡誘導因子AIF是一類進化上高度保守的黃素蛋白。正常情況下,AIF定位在細胞的線粒體內膜,能催化電子在細胞色素C與NAD之間的傳遞,發(fā)揮氧化還原酶的功能；當細胞受到凋亡信號的刺激時,AIF被鈣蛋白酶從線粒體內膜切下,釋放進入胞質,通過其N端的核定位序列轉位進入細胞核,在細胞核中,AIF可直接與DNA結合,與親環(huán)蛋白A (CypA)及H2AX共同作用引起染色質凝集和DNA的大片段化,從而導致細胞凋亡。AIF引起的細胞凋亡是caspase非依賴的,用caspase的廣譜抑制劑Z-VAD fmk等均不能抑制AIF引起的細胞凋亡。目前針對AIF從線粒體釋放入胞質并轉位進入細胞核的機制有較清楚的研究,但是對AIF進入細胞核后如何介導染色質凝集及DNA降解的機制研究的還不夠透徹。我們通過質譜數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)了AIF的一種新的結合蛋白一一SirT1。SirT1是一種NAD+依賴的蛋白去乙酰化酶類,能夠與多條信號轉導通路中的蛋白相互作用,通過對生物體內的賴氨酸殘基、組蛋白、轉錄因子等進行去乙酰化,參與細胞周期調控、細胞衰老凋亡、神經(jīng)保護、胰島素分泌、糖脂類代謝、炎癥氧化應激反應、血管生成等過程,行使其對基因的調控功能。為了進一步研究AIF與SirT1的相互作用,我們進行了細胞內與體外實驗兩方面的探索。在本課題中,我們通過原核表達系統(tǒng)純化的GST標簽蛋白與His標簽蛋白,證明AIF與SirT1能夠在體外直接結合。并且,我們在體內實驗中證明了AIF存在乙�；揎椙襍irT1能夠對其進行去乙酰化,并發(fā)現(xiàn)AIF的K295位是其主要的乙�；稽c。此外,通過凝膠阻滯實驗,我們發(fā)現(xiàn)SirT1對AIF功能的影響并不是通過去乙�；疉IF來影響AIF與DNA的結合能力,而是通過影響AIF與CypA的結合,從而抑制AIF行使誘導凋亡的功能。本論文的實驗結果主要通過體外的生化及功能性實驗為體內研究AIF與SirT1的相互作用補充,同時,為AIF的翻譯后修飾研究揭開序幕,對深入研究AIF入核后行使凋亡的機制提供了依據(jù)。
【關鍵詞】：AIF SirT1 去乙�；� 蛋白純化 凝膠阻滯
【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要6-7
• Abstract7-9
• 文獻綜述9-16
• 第一章 SirT1蛋白與AIF蛋白結合的發(fā)現(xiàn)16-29
• 一、實驗材料、試劑與儀器16-20
• 二、實驗方法20-25
• 三、結果與分析25-27
• 四、本章小結27-29
• 第二章 凋亡誘導刺激下AIF與SirT1相互作用的研究29-36
• 一、實驗材料、試劑與儀器29
• 二、實驗方法29
• 三、結果與分析29-34
• 四、本章小結34-36
• 第三章 SirT1與AIF相關蛋白的體外純化及體外結合的研究36-58
• 一、實驗材料、試劑與儀器36-41
• 二、實驗方法41-50
• 三、結果與分析50-55
• 四、本章小結55-58
• 第四章 體外探究SirT1影響AIF功能的途徑58-64
• 一、實驗材料、試劑與儀器58
• 二、實驗方法58-59
• 三、結果與分析59-62
• 四、本章小結62-64
• 討論64-66
• (參與課題) KAP1473位磷酸化響應DNA損傷應激條件下的機制的研究66-72
• 前言66-67
• 一、實驗材料、試劑、與儀器67
• 二、實驗方法67-68
• 三、實驗結果68-70
• 四、討論70-72
• 附錄Ⅰ72-73
• 附錄Ⅱ73-74
• 參考文獻74-78
• 致謝78-79

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