本文關(guān)鍵詞：Versican基因RNAi慢病毒載體的構(gòu)建及其對毛乳頭細胞聚集性生長的干預(yù)作用

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【摘要】：目的構(gòu)建Versican基因RNAi慢病毒載體并研究Versican對毛乳頭細胞聚集性生長的干預(yù)作用。方法根據(jù)人Versican基因序列,構(gòu)建4個攜帶RNAi序列的慢病毒載體,利用293T細胞進行慢病毒包裝。實驗分為Control組(不做處理)、NC組(用空慢病毒載體包裝的病毒轉(zhuǎn)染細胞)和KD1、KD2、KD3、KD4 Versican RNAi慢病毒感染組。應(yīng)用KD1、KD2、KD3、KD4 Versican RNAi慢病毒及NC慢病毒感染H1299細胞,熒光顯微鏡下觀察感染效率,應(yīng)用Real-time PCR檢測Versican的表達,篩選出感染效率和特異性最高的慢病毒載體進行下一步研究。用慢病毒感染毛乳頭細胞后,用Real-time PCR檢測Versican基因的表達,并用Western blot檢測Versican、ADAMTS4、p-c-JUN蛋白的表達,應(yīng)用光鏡觀察毛乳頭的生長情況。結(jié)果成功構(gòu)建4種慢病毒載體,其中KD2慢病毒感染H1299細胞較其他慢病毒、Control和NC組顯著下調(diào)Versican mRNA的表達(P0.01)。應(yīng)用KD2慢病毒感染毛乳頭細胞后,較Control和NC組明顯下調(diào)毛乳頭細胞Versican mRNA和蛋白的表達(P0.01),ADAMTS4、p-c-JUN蛋白的表達較Control組明顯下調(diào)(P0.01),毛乳頭細胞聚集性生長的特性消失。結(jié)論成功構(gòu)建了Versican基因RNAi慢病毒載體。Versican基因通過c-JUN-ADAMTS-4通路調(diào)控毛乳頭細胞的聚集性生長。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所呼吸科;第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所皮膚科;
【關(guān)鍵詞】： 多功能蛋白聚糖類 RNA干擾 慢病毒 毛乳頭細胞 聚集性生長
【基金】：國家自然科學基金面上項目(30771934)~~
【分類號】：R373
【正文快照】： 毛乳頭細胞(dermal papilla cells,DPCs)是位于毛囊延髓區(qū)的一種成纖維細胞,其主要作用是調(diào)節(jié)毛囊的發(fā)育和再生[1-2]。而毛乳頭細胞是否具有誘導毛囊發(fā)育和再生的能力主要取決于毛乳頭的聚集生長[3-4]。研究發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的毛乳頭細胞在低代數(shù)(㩳7代)時呈聚集性生長。聚集性生

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本文編號：547864