本文關(guān)鍵詞：空腸彎曲菌peb1A與大腸埃希菌ltB基因融合基因的構(gòu)建、表達(dá)及鑒定

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【摘要】：目的采用重疊PCR方法將大腸埃希菌不耐熱腸毒素B亞單位ltB基因和空腸彎曲菌外膜蛋白peb1A基因進(jìn)行連接,構(gòu)建ltB-peb1A融合基因原核表達(dá)系統(tǒng),對(duì)其進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)與鑒定。方法利用PCR技術(shù)擴(kuò)增ltB與peb1A基因,用重疊PCR法將ltB與peb1A基因進(jìn)行融合,然后插入pET-28a(+)中,構(gòu)建原核表達(dá)載體pET28a(+)-LtB-peb1A。用重組體轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白LTB-PEB1,SDS-PAGE分析重組蛋白表達(dá)情況,ELISA法鑒定其與牛Gm1活性,Western blot鑒定重組蛋白的反應(yīng)原性。結(jié)果 PCR及測(cè)序證實(shí)ltB-peb1A融合基因原核表達(dá)載體pET28a(+)-LtB-peb1A構(gòu)建成功,SDS-PAGE分析目的蛋白最高表達(dá)量占全菌總蛋白的28%左右,其分子質(zhì)量單位為40.7ku。ELISA法鑒定純化的重組蛋白與牛Gm1有結(jié)合活性,Western blot分析重組蛋白能被兔抗空腸彎曲菌識(shí)別。結(jié)論成功構(gòu)建了ltB-peb1A融合基因原核表達(dá)載體,并獲得高效表達(dá)的目的蛋白,為空腸彎曲菌黏膜免疫疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)貴州省免疫學(xué)研究生教育創(chuàng)新基地;
【關(guān)鍵詞】： PebA基因 ltB基因 大腸埃希菌不耐熱腸毒素B亞單位 原核表達(dá) 黏膜佐劑 基因融合
【基金】：貴州省教育廳自然科學(xué)研究項(xiàng)目(No.20090105)
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【正文快照】： 空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni)是一種重要的人畜共患病病原菌,自20世紀(jì)80年代起,世界衛(wèi)生組織已將空腸彎曲菌病列為最常見(jiàn)的腸道傳染病之一[1-2]。該菌與格林-巴利綜合征(Guillain-Barrésyndrome,GBS)、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎(reactive arthritis,RA)的發(fā)病密切相關(guān)[3]。臨床上對(duì)

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本文編號(hào)：542213