本文關(guān)鍵詞：與羊膜上皮細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響

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【摘要】：目的：成體干細(xì)胞是具有多向分化潛能的細(xì)胞,在組織工程、細(xì)胞移植及基因工程方面具有良好的應(yīng)用前景。近年來的研究發(fā)現(xiàn),人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞(human amniotic mesenchymal stem cells, hAMSC)在體外具有與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cell, BMSC)相似的造血重建功能,并因其取材方便、來源豐富等優(yōu)勢(shì)有望成為一種更加理想的MSC臨床及科研新來源。同樣來源于羊膜的羊膜上皮細(xì)胞(amniotic epithelial cells, AEC)不僅具備干細(xì)胞的生物學(xué)特性,還能分泌多種細(xì)胞因子。本課題旨在探索AMSC與AEC在體外共培養(yǎng)后,AMSC生物學(xué)特性的變化。SDF-1/CXC4軸是介導(dǎo)MSC在體內(nèi)歸巢及植入的重要的生物軸,本研究對(duì)比共培養(yǎng)前后AMSC中CXCR4的表達(dá),探討SDF-1/CXCR4軸在AMSC歸巢、遷移過程中的作用,以期為AMSC臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ),并希望為臨床提高M(jìn)SC移植療效提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：分別采用組織塊法和消化法從羊膜中分離、培養(yǎng)AMSC和AEC,用密度梯度離心法從健康人骨髓標(biāo)本中分離、培養(yǎng)BMSC,進(jìn)行擴(kuò)增及鑒定。選取P3代傳代培養(yǎng)24h后AMSC和BMSC的培養(yǎng)基上清液,檢測(cè)其中IL-6的含量,同時(shí)對(duì)比兩種細(xì)胞上IL-6受體(CD126)的表達(dá)。用millicell小室建立間接共培養(yǎng)體系,實(shí)驗(yàn)分組為AMSC與AEC共培養(yǎng)組、無血清AMSC培養(yǎng)組、血清AMSC培養(yǎng)組(即常規(guī)培養(yǎng)組),應(yīng)用CCK-8法及臺(tái)盼藍(lán)染色法觀察共培養(yǎng)24h、48h、72h對(duì)AMSC細(xì)胞活力的影響；采取包括流式免疫分析、real-time RT-PCR等方法對(duì)AMSC中CXCR4的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),并結(jié)合millicell小室探索共培養(yǎng)對(duì)AMSC體外遷移能力的影響。 結(jié)果：1、從羊膜分離出的AMSC在形態(tài)和表型上均符合MSC特征,流式分析顯示其上表達(dá)CD29、CD44、CD105,不表達(dá)或低表達(dá)CDlla、CD11b、CD31、CD34、 CD45、HLA-DR、pan-CK。2、AMSC與BMSC有相似生物學(xué)特性,二者流式免疫表型基本一致。3、AMSC能合成和分泌比BMSC更為豐富的IL-6,同時(shí)CD126的表達(dá)亦高于BMSC。4、通過CCK-8法顯示：雖然在24h三組細(xì)胞增殖活性無明顯差異,但是在48h、72h后共培養(yǎng)組細(xì)胞與血清培養(yǎng)組細(xì)胞的活性明顯的高于無血清AMSC組。5、臺(tái)盼藍(lán)染色進(jìn)一步證實(shí),無論在哪個(gè)時(shí)間位點(diǎn),共培養(yǎng)組及血清培養(yǎng)組的存活率均高于無血清培養(yǎng)組。6、流式細(xì)胞儀檢測(cè)提示：AMSC胞內(nèi)的CXCR4在24h內(nèi)呈現(xiàn)出共培養(yǎng)組高于無血清培養(yǎng)組的表達(dá),但與血清培養(yǎng)組無明顯差異,在接下來的48h及72h,三組細(xì)胞CXCR4的胞內(nèi)表達(dá)無明顯差別；對(duì)于細(xì)胞表面CXCR4,三個(gè)培養(yǎng)時(shí)間位點(diǎn)卻均顯示出血清培養(yǎng)組在CXCR4表面表達(dá)的劣勢(shì),而共培養(yǎng)與無血清培養(yǎng)組之間的表達(dá)無差別。7、通過real-time RT-PCR在mRNA水平上檢測(cè)三種培養(yǎng)方式對(duì)細(xì)胞中CXCR4的表達(dá),結(jié)果表明共培養(yǎng)及無血清培養(yǎng)組在三個(gè)時(shí)間位點(diǎn)均高于血清培養(yǎng)組,而共培養(yǎng)與無血清培養(yǎng)組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。8、AMSC體外能夠沿SDF-1濃度梯度趨化遷移,共培養(yǎng)組與無血清培養(yǎng)組遷移細(xì)胞數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別,但兩組的AMSC的遷移數(shù)在三個(gè)時(shí)間位點(diǎn)均高于血清培養(yǎng)組。 結(jié)論：AMSC與AEC能夠在體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增。AMSC在體外與BMSC有相似的生物學(xué)特性,二者均能合成和分泌IL-6,但AMSC表達(dá)更為豐富的IL-6受體(CD126),提示在組織的損傷修復(fù)及造血調(diào)控方面,AMSC可能具有比BMSC更廣闊的應(yīng)用前景。經(jīng)AEC共培養(yǎng)的AMSC表現(xiàn)出良好的生長(zhǎng)活性,并能上調(diào)CXCR4的表達(dá),增強(qiáng)其遷移能力。
【關(guān)鍵詞】：羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞 羊膜上皮細(xì)胞 歸巢 CD126 CXCR4 遷移
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 第一部分 AMSC與AEC的分離培養(yǎng)及鑒定10-34
• 實(shí)驗(yàn)材料11-14
• 實(shí)驗(yàn)方法14-19
• 結(jié)果19-31
• 討論31-34
• 第二部分 與AEC共培養(yǎng)對(duì)AMSC生物學(xué)特性的影響34-55
• 實(shí)驗(yàn)材料35-37
• 實(shí)驗(yàn)方法37-44
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-52
• 討論52-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 綜述59-67
• 參考文獻(xiàn)64-67
• 英文縮寫詞一覽表67-68
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況68-69
• 致謝69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 章守琴;李維佳;史明霞;錢永海;;人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞支持造血的體外實(shí)驗(yàn)[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2010年49期

2 趙智剛,唐曉瓊,李靜,史明霞,鄒萍;慢性粒細(xì)胞性白血病骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離純化及其功能特性的研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2005年29期

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本文編號(hào)：518295