本文關鍵詞：高壓氧預適應對小鼠永久性大腦中動脈閉塞模型的保護作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景 腦血管疾病是當今世界上死亡率最高的三大疾病之一，缺血性腦血管病約占腦血管疾病總數(shù)的85%以上，同時腦缺血也會在許多臨床疾病診治過程出現(xiàn)，如何提高腦組織的缺血耐受程度，減輕缺血后的神經功能損傷，一直是神經外科致力研究的重點和難點。我們課題組前期研究表明，高壓氧預適應(hyperbaric oxygen preconditioning，HBOP)對腦缺血和脊髓損傷具有保護作用，，并且文獻報導HBOP可以誘導心臟、肝臟、腎臟、脊髓及腦組織的缺血耐受，但具體作用機制仍不清楚。 P2X7受體是ATP門控的離子通道P2X受體家族中一個獨特的亞型，在腦組織內廣泛分布，在缺血性腦損傷中處于較上游的調節(jié)位點。腦缺血后，P2X7受體活化，可導致少突膠質細胞死亡、髓磷脂損傷，引起腦白質的損傷；同時，P2X7受體可以活化小膠質細胞和星形膠質細胞，促進IL-1β、TNF-α等炎性因子的釋放，引起組織壞死和凋亡。AQP4是腦組織中表達最多的水通道蛋白(Aquaporins，AQPs)，在維持機體的水平衡和內環(huán)境的穩(wěn)態(tài)中起重要作用。腦缺血后，AQP4參與早期細胞性腦水腫的發(fā)生發(fā)展，并且通過參與調節(jié)星形膠質細胞的功能，影響離子及內環(huán)境的穩(wěn)定和神經信號傳導。 我們課題組前期研究發(fā)現(xiàn)HBOP具有缺血腦保護作用，并且可以調節(jié)脊髓損傷后P2X7受體的表達，文獻表明應用P2X7受體抑制劑BBG后，AQP4的表達水平減弱，并且P2X7受體及AQP4與缺血性腦損傷關系密切。因此我們提出HBOP的缺血腦保護作用可能與其對P2X7受體及AQP4的調節(jié)有關。本課題在經典Longa法基礎上加以改良，建立小鼠的線栓法永久性大腦中動脈閉塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型，并以此模型為基礎探討HBOP對小鼠永久性MCAO模型的缺血腦保護作用及其機制，為HBOP的臨床應用提供新的思路和方向。 第一部分：HBOP對小鼠永久性MCAO模型的缺血腦保護作用 目的：探討HBOP對小鼠永久性MCAO模型中的缺血腦保護作用。 方法:健康成年雄性C57BL/6小鼠，分成假手術對照組(Control+sham)、高壓氧預適應假手術組(HBOP+sham)、MCAO對照組(Control+MCAO)、高壓氧預適應MCAO組(HBOP+MCAO)4個組，采用改良Longa法建立線栓法永久性大腦中動脈閉塞(MCAO)模型。按高壓氧預適應方案(100%O2，2.5ATA，2h/d)進行連續(xù)5天預適應，HBOP+MCAO及HBOP+sham組在最后一次預適應后24h進行MCAO建模。MCAO建模后24h，觀察各組神經功能損傷情況、梗塞灶大小、腦含水量及組織損傷程度。 結果：HBOP能明顯降低小鼠永久性MCAO模型的神經功能學評分，縮小梗塞灶體積，減輕組織損傷程度。 結論：HBOP對小鼠永久性MCAO模型具有保護作用。 第二部分: HBOP對小鼠永久性MCAO模型腦組織中P2X7受體及AQP4表達的影響 目的：觀察HBOP對小鼠永久性MCAO模型腦組織中P2X7受體和AQP4表達的影響。 方法:實驗動物及分組情況、高壓氧預適應方案及MCAO模型建立均與第一部分相同，通過Western Blot及RT-QPCR法檢測MCAO建模后6h、12h、24h三個時間點各組小鼠腦內P2X7受體及AQP4的蛋白表達及mRNA轉錄情況。 結果： 1.Western Blot結果提示：HBOP可以升高小鼠正常腦組織內的P2X7受體及AQP4蛋白水平的表達；提前MCAO后P2X7受體及AQP4蛋白表達的峰值，MCAO建模后24h點HBOP+MCAO組P2X7受體及AQP4的蛋白表達低于Control+MCAO組。 2. RT-QPCR結果提示：HBOP可以提高正常腦組織中內P2X7受體及AQP4的mRNA轉錄水平。在MCAO建模后，HBOP+MCAO組P2X7受體與AQP4轉錄趨勢與Control+MCAO組基本相同，但變化幅度小于MCAO組。 結論：HBOP對腦內P2X7受體及AQP4具有調節(jié)作用。 第三部分：P2X7受體及AQP4在HBOP對小鼠永久性MCAO模型保護作用中的機制研究 目的：利用P2X7受體激動劑BzATP對HBOP后小鼠永久性MCAO模型進行干預，探討HBOP對小鼠永久性MCAO模型保護作用的機制。 方法：實驗動物情況同第一部分，小鼠分為HBOP假手術組(HBOP+sham)、BzATP干預HBOP假手術組(BzATP+HBOP+sham)、HBOP+MCAO組(HBOP+MCAO)、BzATP干預HBOP MCAO組(BzATP+HBOP+MCAO)4個組。HBOP方案及MCAO建模方法同前。在建模后10min按1mg/kg BzATP行側腦室注射。MCAO建模后24h，觀察各組神經功能損傷情況、梗塞灶大小、腦含水量及組織損傷程度，并進行Western Blot及RT-QPCR檢測P2X7受體及AQP4的表達情況。 結果：P2X7受體激動劑BzATP可以增加P2X7受體和AQP4的蛋白表達及mRNA轉錄水平，提高HBOP小鼠的神經功能學評分，增大梗塞灶體積，加重組織損傷程度，拮抗HBOP對小鼠永久性MCAO模型的保護作用。 結論： 1. P2X7受體對AQP4表達具有調節(jié)作用； 2. HBOP可能通過調節(jié)P2X7受體從而影響AQP4的表達來起缺血腦保護作用。
【關鍵詞】：高壓氧預適應 大腦中動脈閉塞 缺血腦保護 P2X7受體 水通道蛋白4
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R743
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• Abstract7-11
• 摘要11-14
• 第一章 前言14-16
• 第二章 高壓氧預適應對小鼠永久性大腦中動脈閉塞模型的缺血腦保護作用16-30
• 2.1 實驗材料與方法16-21
• 2.2 結果21-27
• 2.3 討論27-29
• 2.4 小結29-30
• 第三章 高壓氧預適應對永久性大腦中動脈閉塞建模后腦組織中P2X7受體及水通道蛋白4表達的影響30-49
• 3.1 實驗材料與方法30-37
• 3.2 實驗結果37-45
• 3.3 討論45-48
• 3.4 小結48-49
• 第四章 P2X7受體及AQP4在高壓氧預適應對永久性大腦中動脈閉塞模型保護作用中的機制研究49-59
• 4.1 實驗材料與方法49-50
• 4.2 結果50-57
• 4.3 討論57-58
• 4.4 小結58-59
• 全文結論59-60
• 參考文獻60-66
• 文獻綜述一 腦缺血動物模型的研究進展66-76
• 參考文獻72-76
• 文獻綜述二 AQP4與腦水腫調節(jié)的研究進展76-86
• 參考文獻81-86
• 攻讀學位期間的研究成果86-87
• 致謝87

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王麗雁;蔡文琴;陳鵬慧;;P2X7受體在OPCs缺氧缺血性損傷中作用的初步研究[J];重慶醫(yī)學;2010年21期

2 盧培剛;馮華;王憲榮;吳南;盧佳友;夏勇智;儲衛(wèi)華;唐衛(wèi)華;;高壓氧和低壓缺氧預處理對大鼠脊髓損傷后P2X7受體表達的影響[J];中國臨床神經外科雜志;2008年05期

  本文關鍵詞：高壓氧預適應對小鼠永久性大腦中動脈閉塞模型的保護作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：509097