本文關鍵詞：日本血吸蟲促凋亡基因SjBAD的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：血吸蟲病(Schistosomiasis)至今仍然是一個全球性公共衛(wèi)生問題,數(shù)以百萬計的人受其威脅。主要是由血吸蟲(Schistosome)尾蚴感染而引起的一種寄生蟲病。血吸蟲病的防治方法仍然以吡喹酮的給藥治療為主,但是目前已有報道長期使用吡喹酮可以誘導產(chǎn)生抗藥性。因此目前發(fā)展高效、安全的疫苗是持續(xù)控制血吸蟲病的一種理想的研究方向。細胞凋亡是由多基因嚴格控制的細胞程序性死亡。細胞凋亡對維持生物體正常的生長發(fā)育以及內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定具有重要作用。本課題組前期的研究表明,不同適宜性宿主來源的日本血吸蟲童蟲在形態(tài)、發(fā)育以及蟲體細胞凋亡現(xiàn)象方面都存在顯著的差別,推測細胞凋亡可以影響日本血吸蟲蟲體的生長發(fā)育。BAD 是 Bcl-2 相關的死亡啟動子(bcl-2 associated death promoter),.屬于 Bcl-2家族的促凋亡基因,僅含有BH3。本文SjBAD的基因序列來自歐洲分子生物學實驗室數(shù)據(jù)庫(EMBL,http://www.ebi.ac.uk/),基因編號為 SjD AY814710.1,設計特異引物,選用42d蟲體cDNA為模板。PCR擴增,克隆了日本血吸蟲SjBADORF編碼的部分基因,長度為594bp,編碼197個氨基酸。選用pET-28a(+),構(gòu)建了重組表達質(zhì)粒pET-28a(+)-SjBAD,并將其轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21中,成功誘導了重組蛋白pET-28a(+)-SjBAD,分子質(zhì)量約為27kDa。實時定量PCR分析表明SjBAD基因在日本血吸蟲蟲體的各個發(fā)育階段均有轉(zhuǎn)錄,在14d蟲體中表達量最高,隨后隨著蟲體的生長,相對表達量逐漸降低,在42d雄蟲的表達量高于雌蟲。Western blotting分析表明重組SjBAD具有較好的抗原性和免疫原性。間接ELISA分析表明重組蛋白免疫小鼠產(chǎn)生了高水平的特異性IgG抗體。動物免疫試驗表明,同PBS對照組相比較,重組蛋白SjBAD在BALB/c小鼠體內(nèi)誘導了 27.50%和33.57%的減蟲率,及39.80%和42.06%的肝臟蟲卵減少率,差異都非常顯著。成功構(gòu)建了真核重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-SjBAD,并將其轉(zhuǎn)染到293T細胞中,實時定量PCR檢測表明SjBAD在轉(zhuǎn)染293T細胞36h表達量最高,流式細胞術檢測表明日本血吸蟲促凋亡基因SjBAD能夠促進293T細胞凋亡。本文為深入開展SjBAD的生物學功能研究,及篩選針對SjBAD的藥物靶標提供了基礎。
【關鍵詞】：日本血吸蟲 細胞凋亡 BAD
【學位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R383.24
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 英文縮略詞表9-11
• 前言11-12
• 第一篇 緒論12-22
• 第一章 文獻綜述12-22
• 1 血吸蟲病與血吸蟲的生活史12-13
• 1.1 血吸蟲病12
• 1.2 血吸蟲的生活史12-13
• 2 細胞凋亡概述13-14
• 2.1 細胞凋亡與死亡13
• 2.2 哺乳動物細胞凋亡的三種途徑13-14
• 3 Bcl-2蛋白家族和BAD蛋白14-15
• 3.1 Bcl-2蛋白家族14
• 3.2 BAD蛋白14-15
• 4 血吸蟲細胞凋亡的研究進展15
• 5 細胞凋亡的檢測15-16
• 5.1 形態(tài)學的檢測15
• 5.2 DNA斷裂檢測分析15-16
• 5.3 凋亡相關因子的檢測16
• 5.4 流式細胞儀分析(flow cytometry assay,FCA)檢測細胞凋亡16
• 6 本研究的總體研究思路16-17
• 參考文獻17-22
• 第二篇 試驗研究22-62
• 第二章 日本血吸蟲促凋亡基因SjBAD的原核克隆表達及免疫保護效果評估22-48
• 1 材料與方法22-35
• 1.1 實驗材料22-27
• 1.2 實驗方法27-35
• 2 試驗結(jié)果35-44
• 2.1 日本血吸蟲促凋亡基因SjBAD的克隆表達及生物信息學分析35-37
• 2.2 Real-time PCR檢測SjBAD在不同時期日本血吸蟲蟲體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄水平37-38
• 2.3 重組質(zhì)粒pET-28a(+)-SjBAD的構(gòu)建及鑒定38-39
• 2.4 重組蛋白SjBAD的表達與分析39-41
• 2.5 Western blotting檢測重組蛋白SjBAD的抗原性和免疫原性41-42
• 2.6 重組蛋白SjBAD免疫保護效果評估42-43
• 2.7 ELISA檢測重組蛋白SjBAD誘導小鼠體內(nèi)產(chǎn)生的特異性IgG抗體水平43-44
• 3 討論44-45
• 參考文獻45-48
• 第三章 日本血吸蟲促凋亡基因SjBAD真核克隆表達及相關功能研究48-62
• 1 材料與方法48-54
• 1.1 實驗材料48-50
• 1.2 試驗方法50-54
• 2 試驗結(jié)果54-60
• 2.1 日本血吸蟲促凋亡基因SjBAD的擴增54-55
• 2.2 構(gòu)建與鑒定真核表達重組質(zhì)粒pMD-19T-SjBAD55-56
• 2.3 真核重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-SjBAD的構(gòu)建與鑒定56-57
• 2.4 293T細胞的培養(yǎng)57
• 2.5 熒光實時定量PCR檢測SjBAD在293T細胞內(nèi)不同時期的轉(zhuǎn)錄水平57-58
• 2.6 細胞流式術檢測日本血吸蟲促凋亡基因SjBAD的作用58-60
• 3 討論60-61
• 參考文獻61-62
• 全文總結(jié)62-64
• 致謝64-66
• 論文發(fā)表情況66

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曹玲;;我科學家公布日本血吸蟲“基因天書”[J];發(fā)明與創(chuàng)新(綜合版);2006年07期

2 ;抑制一種酶的活性可致日本血吸蟲死亡[J];山東中醫(yī)藥大學學報;2012年04期

3 何毅勛,彭辛午;日本血吸蟲發(fā)育的掃描電鏡觀察[J];寄生蟲學與寄生蟲病雜志;1983年04期

4 黃左鉞,勵正康,邱云,王琴美;呼吸在日本血吸蟲能量代謝中的作用[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;1987年03期

5 張萍;;日本血吸蟲的采集、固定和保存法簡介[J];寄生蟲病防治與研究;1995年03期

6 帥連云,曹建平,仇錦波;日本血吸蟲純凈活蟲卵的制備[J];鎮(zhèn)江醫(yī)學院學報;1998年04期

7 沈際佳,蔣作君,余新炳,汪淵,汪學龍,吳忠道,周青;日本血吸蟲線粒體大亞基核糖體基因的亞克隆、測序及同源性分析[J];細胞與分子免疫學雜志;2000年04期

8 王文實,李雍龍;日本血吸蟲細胞凋亡及其誘導的研究[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2000年05期

9 吳忠道,余新炳,徐勁,曹愛蓮,羅建威,熊小燕,耿巖;日本血吸蟲細菌人工染色體文庫的初步構(gòu)建(英文)[J];廣東寄生蟲學會年報;2000年00期

10 卞國武,余新炳,吳忠道;日本血吸蟲(中國大陸株)成蟲表達序列標簽的獲取及分析[J];廣東寄生蟲學會年報;2000年00期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 程國鋒;林矯矯;馮新港;傅志強;苑純秀;周元聰;蔡幼民;;日本血吸蟲性別發(fā)育蛋白質(zhì)組研究[A];中國蛋白質(zhì)組學首屆學術大會論文摘要集[C];2003年

2 王欣之;矯矯;石耀軍;馮新港;苑純秀;金亞美;;日本血吸蟲7d童蟲消減cDNA文庫的構(gòu)建及測序分析[A];第二屆全國人畜共患病學術研討會論文集[C];2008年

3 沈際佳;蔣作君;余新炳;汪學龍;王維;;編碼日本血吸蟲10.6KD膜蛋白基因的克隆、測序及表達[A];中國動物學會第六屆全國青年寄生蟲學工作者學術討論會論文摘要集[C];2000年

4 夏艷勛;林矯矯;趙傳壁;陳益;賀桂芬;;日本血吸蟲性別差異表達基因的篩選及研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會畜牧獸醫(yī)生物技術學分會暨中國免疫學會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

5 周立;榮秋亮;王業(yè)富;;日本血吸蟲熒光定量PCR檢測方法的建立[A];2012年湖北生物產(chǎn)業(yè)發(fā)展高端論壇暨湖北省生物工程學會2012年度學術交流會論文匯編[C];2012年

6 楊勝輝;劉碧源;劉彥;周東明;曾慶仁;曾鐵兵;喻容;蔡力汀;張順科;方會龍;;端粒酶催化亞單位基因經(jīng)雙嗜性逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導入日本血吸蟲體外培養(yǎng)細胞的研究[A];全國寄生蟲學與熱帶醫(yī)學學術研討會論文集[C];2008年

7 葉向群;;釘螺體內(nèi)葉巢外睪吸蟲與日本血吸蟲對抗性的研究[A];中國動物學會第八次全國寄生蟲學學術討論會論文摘要匯編[C];2001年

8 陸珂;苑純秀;朱傳剛;石耀軍;李浩;劉金明;林矯矯;;日本血吸蟲膜蛋白重組抗原免疫小鼠的保護力評估研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第九次學術研討會論文摘要集[C];2006年

9 孔娟;馮正;徐斌;鄧王平;鞠川;胡薇;;日本血吸蟲腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因的克隆、表達及各蟲期轉(zhuǎn)錄和表達情況的研究[A];全國寄生蟲學與熱帶醫(yī)學學術研討會論文集[C];2008年

10 徐斌;馮正;鞠川;許學年;莫筱謹;鄧王平;孔娟;胡薇;;日本血吸蟲金屬蛋白酶基因的克隆和表達及其對小鼠的免疫保護性研究[A];全國寄生蟲學與熱帶醫(yī)學學術研討會論文集[C];2008年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 記者 陳衛(wèi)東;日本血吸蟲基因組測序完成[N];科技日報;2009年

2 通訊員 彭振 記者 程守勤;抑制一種酶的活性可致日本血吸蟲死亡[N];健康報;2012年

3 記者　曹玲娟;我科學家公布日本血吸蟲“基因天書”[N];人民日報;2006年

4 記者　 章迪思 實習生 周惠婷;血吸蟲基因“天書”全球發(fā)布[N];解放日報;2006年

5 岳陽;國內(nèi)生物信息平臺首發(fā)大規(guī)�；蚪M數(shù)據(jù)[N];中國醫(yī)藥報;2006年

6 記者　謝軍;我國首次向全球公布日本血吸蟲基因組工作框架圖序列數(shù)據(jù)[N];光明日報;2006年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉建;日本血吸蟲氧化還原相關蛋白功能、結(jié)構(gòu)及應用研究[D];華東理工大學;2012年

2 張玉梅;日本血吸蟲感染宿主濾泡輔助性T細胞變化及功能的研究[D];中國疾病預防控制中心;2016年

3 朱麗慧;日本血吸蟲exosomes調(diào)控蟲體與宿主互作的功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2016年

4 王書書;日本血吸蟲重組蛋白Cystatin保護小鼠結(jié)腸炎及其免疫調(diào)節(jié)機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

5 洪煬;日本血吸蟲童蟲在不同敏感性宿主體內(nèi)差異表達蛋白的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2011年

6 劉昒;日本血吸蟲骨形成蛋白分子的鑒定和功能研究[D];武漢大學;2013年

7 武闖;日本血吸蟲免疫球蛋白結(jié)合蛋白質(zhì)組的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

8 劉鋒;人CD34+造血干/祖細胞和日本血吸蟲的轉(zhuǎn)錄組學和蛋白質(zhì)組學研究[D];復旦大學;2006年

9 何原;日本血吸蟲酚氧化酶基因結(jié)構(gòu)及其功能的研究[D];武漢大學;2012年

10 徐靜瑋;日本血吸蟲抗原誘導巨噬細胞極化的分子證據(jù)[D];南京醫(yī)科大學;2012年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王宇清;感染日本血吸蟲引起宿主循環(huán)MicroRNAs表達變化的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

2 刀金威;日本血吸蟲凋亡抑制因子SjBIRP功能的初步研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

3 劉艷濤;日本血吸蟲表膜蛋白SjOST48的初步研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

4 馬帥;日本血吸蟲TOR基因克隆表達及生物學功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

5 趙登云;日本血吸蟲蟲卵及相關抗原的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

6 杜曉峰;日本血吸蟲入侵宿主過程中關鍵尾蚴蛋白酶的研究[D];復旦大學;2014年

7 趙波;吡喹酮（PZQ）衍生物對日本血吸蟲PZQ抗性蟲體的生物學效應及PZQ抗性蟲體蛋白質(zhì)組學分析[D];蘇州大學;2015年

8 華夢晴;日本血吸蟲Nanos蛋白的基因定位與功能初步鑒定[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

9 邵延靖;日本血吸蟲Vasa3基因定位與功能的初步研究[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

10 卞超蓉;日本血吸蟲不同蟲株的群體遺傳學分析[D];蘇州大學;2015年

  本文關鍵詞：日本血吸蟲促凋亡基因SjBAD的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：507374