本文關(guān)鍵詞：重構(gòu)大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞骨架對AQP4和Kir4.1基因表達影響的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：探討大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞體外分離、純化及培養(yǎng)條件,并對其進行鑒定；探討不同濃度微絲聚合齊Jasplakinolide (JSK)和不同濃度的微絲解聚劑細胞松弛素D(Cytochalasin D, Cyt D)對大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞的細胞骨架的影響；探討JSK及Cyt D對大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞AQP4和Kir4.1基因表達的影響。 方法：取新生SD大鼠10只,在無菌條件下分離出脊髓組織,體外培養(yǎng)原代大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞,并采用免疫熒光法檢測GFAP蛋白的表達對星形膠質(zhì)細胞進行鑒定；將星形膠質(zhì)細胞分為JSK實驗組和Cyt D實驗組并設(shè)立空白對照組。JSK實驗組采用濃度為0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.40μg/ml、0.80μg/ml和1.00μg/ml的JSK分別干預(yù)細胞2h、12h和24h；對于Cyt D組采用濃度為0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.40μg/ml、0.80μg/ml和1.00μg/ml的Cyt D分別干預(yù)細胞2h、12h和24h,MTT法檢測不同濃度的JSK及Cyt D對大鼠星形膠質(zhì)細胞的增殖的影響；采用鬼筆環(huán)肽和Hoechst33342染色,激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度的JSK及Cyt D對星形膠質(zhì)細胞細胞骨架的影響；Real-time PCR法檢測不同濃度的JSK及Cyt D對星形膠質(zhì)細胞中AQP4和Kir4.1mRNA的表達水平的影響。 結(jié)果：大鼠星形膠質(zhì)細胞體外培養(yǎng)14天后,細胞鋪滿培養(yǎng)皿,GFAP蛋白表達陽性率為90,符合進一步實驗要求；MTT檢測結(jié)果顯示,與空白對照組相比,應(yīng)用濃度為JSK0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml干預(yù)細胞2h后,細胞的抑制率無明顯差異(P0.05),干預(yù)細胞12h和24h后具有統(tǒng)計學意義(P0.05); Cyt D組MTT結(jié)果顯示,0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml濃度的Cyt D干預(yù)2h后,細胞的抑制率無明顯差異(P0.05),干預(yù)細胞12h和24h后具有統(tǒng)計學意義(P0.05)；激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果顯示,各濃度的JSK作用于星形膠質(zhì)細胞2h后,均能使細胞微絲發(fā)生團聚,各Cyt D作用大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞2h后,微絲發(fā)生解聚、彎曲,但極性未失；Real-time PCR檢測顯示,在0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.40μg/ml濃度的JSK作用2h后,可以顯著降低細胞中AQP4和Kir4.1基因的表達,與空白對照組相比有統(tǒng)計學意義(P0.05);而0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml濃度的Cyt D能夠上調(diào)AQP1、AQP4和Kit4.1基因的表達與空白對照組相比有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結(jié)論：大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞可以進行體外培養(yǎng)；JSK和Cyt D可使大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞微絲發(fā)生重構(gòu)；JSK和Cyt D分別可以下調(diào)AQP4和Kir4.1基因的表達及上調(diào)AQP4和Kir4.1基因的表達。
【關(guān)鍵詞】：星形膠質(zhì)細胞 細胞骨架 水通道蛋白
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-12
• 第二章 文獻回顧12-13
• 第三章 細胞松弛素D重構(gòu)大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞骨架對AQP1、AQP4和Kir4.1基因表達的影響13-25
• 3.1 材料與方法13-18
• 3.1.1 實驗動物13
• 3.1.2 主要儀器與試劑13-15
• 3.1.3 主要溶液的配制15
• 3.1.4 星形膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)15-16
• 3.1.5 星形膠質(zhì)細胞的傳代培養(yǎng)16
• 3.1.6 星形膠質(zhì)細胞的鑒定16
• 3.1.7 MTT檢測16-17
• 3.1.8 激光共聚焦顯微觀察17
• 3.1.9 實時熒光定量法檢測基因的表達17-18
• 3.1.9.1 細胞總RNA提取17
• 3.1.9.2 RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA17-18
• 3.1.9.3 Real-time PCR18
• 3.1.9.4 統(tǒng)計學分析18
• 3.2 結(jié)果18-22
• 3.2.1 原代大鼠星形膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)及鑒定18-19
• 3.2.2 Cyt D對細胞增殖的影響19
• 3.2.3 Cyt D對細胞骨架的影響19-22
• 3.2.4 Cyt D對AQP1,AQP4及Kir 4.1基因的表達的影響22
• 3.3 討論22-25
• 第四章 Jasplakinolide重構(gòu)大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞骨架對AQP4和Kir4.1基因表達的影響25-37
• 4.1 材料和方法25-30
• 4.1.1 實驗動物25
• 4.1.2 主要實驗儀器與實驗試劑25-26
• 4.1.2.1 主要實驗儀器25-26
• 4.1.2.2 主要實驗試劑26
• 4.1.3 主要溶液的配制26-27
• 4.1.4 星形膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)27
• 4.1.5 星形膠質(zhì)細胞的傳代培養(yǎng)27
• 4.1.6 星形膠質(zhì)細胞的鑒定27-28
• 4.1.7 MTT檢測28
• 4.1.8 激光共聚焦顯微觀察28
• 4.1.9 實時熒光定量法檢測基因的表達28-30
• 4.1.9.1 細胞總RNA提取28-29
• 4.1.9.2 RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA29
• 4.1.9.3 Real-time PCR29
• 4.1.9.4 統(tǒng)計學分析29-30
• 4.2 結(jié)果30-34
• 4.2.1 大鼠星形膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)與鑒定30
• 4.2.2 JSK對星形膠質(zhì)細胞增殖的影響30
• 4.2.3 JSK對星形膠質(zhì)細胞骨架的影響30-33
• 4.2.4 JSK對AQP4及Kir4.1基因的表達的影響33-34
• 4.3 討論34-37
• 第五章 參考文獻37-39
• 第六章 小結(jié)39-40
• 在學校期間的研究成果40-41
• 縮略詞表41-42
• 致謝42

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王克萬,漆松濤,楊志煥,王正國,朱佩芳,楊開軍,劉承勇,黃理金;培養(yǎng)大鼠星形膠質(zhì)細胞牽張損傷后超微結(jié)構(gòu)的變化[J];第一軍醫(yī)大學學報;2002年08期

2 ;Aquaporins as potential drug targets[J];Acta Pharmacologica Sinica;2006年04期

3 王彥明;余家闊;于長隆;敖英芳;王健全;崔國慶;胡躍林;;Pridie鉆孔術(shù)修復(fù)膝關(guān)節(jié)軟骨全層缺損的臨床療效觀察[J];中國微創(chuàng)外科雜志;2006年11期

  本文關(guān)鍵詞：重構(gòu)大鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞骨架對AQP4和Kir4.1基因表達影響的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：481479