本文關(guān)鍵詞：Foxp3逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體增強(qiáng)Treg細(xì)胞功能，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建Treg(regulatory T cell)細(xì)胞關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Foxp3逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體,并將其轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定表達(dá)于Treg細(xì)胞中,檢測Treg細(xì)胞因子改變。方法設(shè)計編碼區(qū)全長序列引物,Hi Fi PCR(high fidelity reverse transcription polymerase chain reaction)擴(kuò)增編碼區(qū)序列。膠回收PCR產(chǎn)物,將PCR產(chǎn)物與線性化p SCV-Bsd RFP質(zhì)粒連接并測序鑒定。將p SCV-Bsd RFP質(zhì)粒電轉(zhuǎn)入骨架質(zhì)粒BJ5183,將其轉(zhuǎn)染293病毒包裝細(xì)胞體系,包裝病毒。反復(fù)感染4次得到高滴度p SCV-Bsd RFP-Foxp3逆轉(zhuǎn)錄病毒液。將此高表達(dá)逆轉(zhuǎn)錄病毒命名為p SCV-Bsd RFP-Foxp3,感染大鼠脾臟來源Treg細(xì)胞,G418篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株。ELISA(enzymelinked immunosorbent assay)檢測Treg細(xì)胞因子IL-10和轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的改變。結(jié)果 Hi Fi PCR得到編碼區(qū)全長序列DNA,連接到p SCV-Bsd RFP質(zhì)粒,測序鑒定擴(kuò)增序列符合編碼區(qū)序列。p SCV-Bsd RFP質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染BJ5183后,轉(zhuǎn)染293病毒包裝體系,可見感染細(xì)胞有紅色熒光表達(dá)。p SCV-Bsd RFP-Foxp3病毒感染Treg細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)后,可見細(xì)胞內(nèi)紅色熒光表達(dá)。IL-10和TGF-β表達(dá)增強(qiáng)。結(jié)論成功構(gòu)建Foxp3高表達(dá)逆轉(zhuǎn)錄病毒p SCV-Bsd RFP-Foxp3,轉(zhuǎn)染大鼠脾臟來源Treg細(xì)胞并得到穩(wěn)定高表達(dá)Foxp3的Treg細(xì)胞。p SCV-Bsd RFP-Foxp3可增強(qiáng)Treg細(xì)胞分泌IL-10和TGF-β功能。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科;
【關(guān)鍵詞】： 逆轉(zhuǎn)錄病毒 Foxp 質(zhì)粒 Treg
【基金】：博士點新教師基金(20115503120012) 重慶市衛(wèi)計委基金(2011-2-103) 重慶市教委基金(KJ1500207)
【分類號】：R392
【正文快照】： Foxp3是Treg細(xì)胞的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,Treg細(xì)胞發(fā)揮免疫調(diào)控的作用需要通過轉(zhuǎn)錄因子Treg細(xì)胞進(jìn)行,因此調(diào)控Foxp3的表達(dá)是否可以調(diào)控Treg細(xì)胞在免疫調(diào)控中的作用值得我們研究和探索,本文構(gòu)建了Foxp3高表達(dá)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,并將其轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定表達(dá)于Treg細(xì)胞中,檢測p SCV-Bsd RFP-Foxp3

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本文編號：461877