本文關(guān)鍵詞：乳鼠骨髓來源間充質(zhì)干細胞抑制樹突狀細胞成熟和T淋巴細胞增殖的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的初步研究小鼠乳鼠骨髓源性間充質(zhì)干細胞（BM-MSCs）的分離培養(yǎng)、純化方法，并進行細胞表面標志和體外分化能力的鑒定；檢測骨髓源性間充質(zhì)干細胞對于樹突狀細胞（DCs）抑制成熟的作用，以及對異體T淋巴細胞的抑制作用。 方法全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)C57BL/6乳鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（BM-MSCs），經(jīng)過傳代純化后的第四代細胞，流式細胞儀檢測細胞表面CD34、CD29、CD105、MHC-Ⅱ抗原的表達；同時取第四代細胞體外誘導(dǎo)向成脂、成骨方向分化以鑒定MSCs。獲取Balb/c小鼠骨髓細胞，在含重組小鼠粒-巨噬細胞集落刺激因子GM-CSF(20μg/L)和重組小鼠白細胞介素4（IL-4，10μg/L)的完全培養(yǎng)基中對其進行誘導(dǎo)培養(yǎng)及擴增，培養(yǎng)至第8天收獲DCs；實驗分為4組：單純對照組，LPS刺激組， DCs加MSCs共培養(yǎng)組，LPS刺激的DCs加MSCs共培養(yǎng)組；用流式細胞學(xué)檢測DCs的表面標志CD11C、CD86、MHC-Ⅱ的變化。建立混合淋巴細胞反應(yīng)體系，檢測MSCs體外抑制T淋巴細胞增殖的能力，實驗分為3組：陰性對照組為C57BL/6的T淋巴細胞，，空白對照組的DCs刺激T淋巴細胞，實驗干預(yù)組為MSCs于DCs共培養(yǎng)后刺激T淋巴細胞。 結(jié)果小鼠乳鼠提取培養(yǎng)出的骨髓源性MSCs,體外可以大量增殖，細胞干性穩(wěn)定；純化后的第四代可以向成骨、成脂方向分化，并且MSCs經(jīng)流式細胞術(shù)檢測CD29、MHC-Ⅱ、CD105及CD34表分別為98.300%、0.898%、45.400%、0.849%，符合MSCs抗原表達。BM-MSCs與DCs的共培養(yǎng)，抑制了DCs表面MHC-Ⅱ和共刺激分子CD86的表達，抑制DCs的發(fā)育成熟，這種阻礙作用不可被脂多糖（LPS）所逆轉(zhuǎn)。MSCs對DCs誘導(dǎo)的T淋巴細胞增殖有抑制作用，空白對照組組CD4+T細胞和CD8+T細胞的分裂比例分別為30.8%和33.4%，MSCs干預(yù)組CD4+T和CD8+T細胞的分裂比例分別為5.36%和3.94%。 結(jié)論隨著供體年齡的增長，骨髓間充質(zhì)干細胞的數(shù)量減少，增殖能力衰退；本實驗探究出乳鼠提取培養(yǎng)BM-MSCs的方案，并且證實提取出的細胞在體外具有強烈的免疫抑制作用，應(yīng)用MSCs可以抑制DCs的成熟，對T淋巴細胞的增殖亦有抑制作用，從而為誘導(dǎo)移植免疫耐受提供了一種新的途徑。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細胞 樹突狀細胞 T淋巴細胞增殖
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 全文主要縮略5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-20
• 一．材料13-15
• 二．mMSCs 的分離及培養(yǎng)15-16
• 三．流式細胞儀檢測 mMSCs 表面標志16
• 四．mMSCs 誘導(dǎo)分化能力的鑒定：成骨和成脂細胞誘導(dǎo)16-17
• 五．小鼠骨髓源性樹突狀細胞（BM-DCs）的分離和培養(yǎng)17
• 六．流式細胞學(xué)鑒定 BMDCs 的表面標志17-18
• 七．MSCs 與 DCs 共培養(yǎng)18
• 八．CFSE 方法檢測 T 淋巴細胞增殖18-19
• 九．統(tǒng)計學(xué)處理19-20
• 結(jié)果20-24
• 一．BM-MSCs 形態(tài)學(xué)觀察20
• 二．BM-MSCs 表面標記的測定20-21
• 三．BM-MSCs 多向分化的能力鑒定21-22
• 四．間充質(zhì)干細胞（MSCs）增殖曲線22
• 五．MSCs 對 LPS 刺激的 DCs 表面分子表達的影響22-23
• 六．MSCs 干預(yù)后的 DCs 抑制同種混合淋巴細胞反應(yīng)23-24
• 討論24-26
• 參考文獻26-28
• 綜述28-47
• 參考文獻37-47
• 致謝47-48

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：乳鼠骨髓來源間充質(zhì)干細胞抑制樹突狀細胞成熟和T淋巴細胞增殖的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：458062