本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌Rv0757基因的原核表達(dá)及其編碼蛋白對(duì)巨噬細(xì)胞功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建結(jié)核桿菌Rv0757基因原核表達(dá)重組質(zhì)粒pET28a-Rv0757,并研究表達(dá)的目標(biāo)蛋白對(duì)小鼠骨髓巨噬細(xì)胞株ANA-1細(xì)胞的作用。方法將擴(kuò)增出的Rv0757基因重組到原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+),并通過SDS-PAGE和Western blot鑒定誘導(dǎo)表達(dá)的目的蛋白。純化目標(biāo)蛋白后將目標(biāo)蛋白PhoP作用于小鼠ANA-1細(xì)胞,檢測(cè)活細(xì)胞數(shù)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)、一氧化氮(NO)和細(xì)胞凋亡指標(biāo)。結(jié)果成功構(gòu)建出pET28a-Rv0757原核表達(dá)質(zhì)粒,誘導(dǎo)表達(dá)的目標(biāo)蛋白經(jīng)SDS-PAGE和Western blot鑒定分析,其相對(duì)分子質(zhì)量約為32×103。目的蛋白作用于小鼠ANA-1細(xì)胞后對(duì)活細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞上清LDH活力無明顯影響,但可以明顯抑制細(xì)胞釋放NO和細(xì)胞凋亡。結(jié)論本研究成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET28a-Rv0757,并成功表達(dá)出目標(biāo)蛋白,該蛋白對(duì)小鼠ANA-1細(xì)胞沒有毒性損傷,但可以抑制細(xì)胞釋放NO和細(xì)胞的凋亡。
【作者單位】： 四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院感染免疫研究室;
【關(guān)鍵詞】： 結(jié)核分枝桿菌 Rv基因 PhoP蛋白 巨噬細(xì)胞功能
【基金】：國家重大傳染病科技專項(xiàng)(No.2012X10003008-004) 博士點(diǎn)基金(No.20110981110046)資助
【分類號(hào)】：R378.911
【正文快照】： 結(jié)核桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)是結(jié)核病的病原菌,由結(jié)核桿菌引起的結(jié)核病是一種以呼吸道為主要傳播途徑,嚴(yán)重危害人類健康的傳染病。WHO估計(jì),2011年有870萬新發(fā)結(jié)核病病例,因結(jié)核病而死亡的有140萬人[1]。結(jié)核病的發(fā)病率、病死率因?yàn)榻昴退帯⒍嘀啬退幗Y(jié)核菌株的

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