目的研究煙草煙霧提取物(cigarette smoke extract,CSE)對體外培養(yǎng)的大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞凋亡的影響,探究其潛在機制。方法體外培養(yǎng)大鼠肺泡上皮RLE-6TN細胞株24 h,分別加入0.5%、1.0%、2.0%CSE共培養(yǎng)48 h;轉化生長因子-β1(TGF-β1)受體抑制劑(SB431542)500 nmol/L作用RLE-6TN細胞株24 h后,加入2.0%CSE共培養(yǎng)48 h。Hoechst染色后觀察細胞核的形態(tài)學改變;流式細胞儀檢測細胞凋亡率;Western blot檢測TGF-β1、p-Smad2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3裂解片段(Cleaved Caspase-3)的表達。結果經(jīng)不同濃度(0.5%、1.0%、2.0%)的CSE作用48 h后,Hoechst染色可見部分凋亡細胞,核發(fā)白、固縮、染色質邊集等現(xiàn)象;細胞早期凋亡率由(5.270±0.526)%增加至(32.580±0.413)%(P<0.01);TGF-β1、p-Smad2和Cleaved Caspase-3蛋白表達量增加;TGF-β1受體抑制劑(SB431542)干預后,Smad2和C...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 藥物、試劑和儀器
    1.2 細胞株來源及培養(yǎng)
    1.3 煙草煙霧提取物的制備
    1.4 Hoechst染色
    1.5 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡
    1.6 Western blot檢測TGF-β1、Smad2、p-Smad2和Cleaved Caspase-3蛋白的表達
    1.7 TGF-β1受體抑制劑SB431542阻滯TGF-β1/Smad2信號通路
    1.8 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 CSE對RLE-6TN細胞核形態(tài)的影響
    2.2 CSE對可誘導大鼠肺泡Ⅱ型上皮RLE-6TN細胞凋亡的影響
    2.3 CSE對RLE-6TN細胞TGF-β1/Smad2信號通路及Cleaved Caspase-3蛋白的影響
    2.4 阻滯TGF-β1/Smad2信號通路對CSE誘導的RLE-6TN細胞Cleaved Caspase-3蛋白表達的影響
3討論



本文編號：4031612