目的：本項(xiàng)目通過構(gòu)建攜帶RP105基因的復(fù)制缺陷型重組腺病毒載體，間接冠脈在體轉(zhuǎn)染大鼠心肌，使RP105在心肌組織高表達(dá)，在大鼠在體心臟缺血再灌注模型中，以TLR-4信號(hào)通路為切入點(diǎn)，從基因表達(dá)、蛋白合成等多個(gè)層次研究RP105對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，探討其分子機(jī)制。 方法： SPF級(jí)雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分為4組(n=10)：生理鹽水+假手術(shù)組(Sham組，只穿線不結(jié)扎)、生理鹽水+缺血再灌注組(I/R組）、Ad-RP105+缺血再灌注組(Ad-R組)、Ad-GFP+缺血再灌注組(Ad-G組)。重組腺病毒間接冠狀動(dòng)脈轉(zhuǎn)染大鼠心肌，3d后建立心肌缺血再灌注模型。術(shù)后2h空氣栓塞法處死大鼠，采用光鏡觀察心肌組織的病理形態(tài)學(xué)改變；Evans blue和TTC雙染法估測(cè)心肌梗死面積；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定心肌TNF-α和IL-6的含量；Real-time PCR和Western blot檢測(cè)心肌RP105、TLR-4、MyD88、 NF-κB mRNA水平和蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果：(1)采用攜帶綠色熒光蛋白基因的重組腺病毒(Ad-GFP)成功轉(zhuǎn)染大鼠在體心肌，結(jié)果顯示，大...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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圖3：大鼠心肌腺病毒成功轉(zhuǎn)染后的綠色熒光表達(dá)成功

大鼠心肌腺病毒成功轉(zhuǎn)染后的綠色熒光表模型的成功構(gòu)建評(píng)估：在血管結(jié)扎即刻，肢體Ⅱ?qū)?lián)明缺血模型構(gòu)建成功；松開結(jié)扎線，可。本次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)造模進(jìn)展順利，在結(jié)電圖出現(xiàn)S-T段顯著抬高，QRS波增失常，如多為室性心律失常，部分大鼠驗(yàn)造模中，40只大鼠中因?yàn)槁樽磉^量成功率達(dá)到95%。....

圖4大鼠各時(shí)間段心電圖表現(xiàn)（Ⅱ?qū)?lián)）

說明成功再灌。本次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)造模進(jìn)展順利，在結(jié)扎即刻，可見心尖由于缺血變白，肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖出現(xiàn)S-T段顯著抬高，QRS波增高、變寬；結(jié)扎血管后6-8min開始出現(xiàn)心律失常，如多為室性心律失常，部分大鼠甚至發(fā)生室顫，可用利多卡因搶救；在本次實(shí)驗(yàn)造模中，40只大鼠中因?yàn)槁樽磉^....

圖5各組心肌光學(xué)顯微鏡下組織病理改變(HE,×100)

Ad-R組Ad-G組圖5各組心肌光學(xué)顯微鏡下組織病理改變(HE,×100)2.2心肌梗死面積的檢測(cè)心肌梗死面積是評(píng)價(jià)心肌梗死嚴(yán)重程度的一個(gè)金標(biāo)準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用Evansblue和TTC雙染法進(jìn)行心肌染色[22]，計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)計(jì)算心肌缺血和梗死面積；梗死面....

圖6各組大鼠心注：左圖從上到下依次為IR組、Ad-R組、Ad

圖6各組大鼠心注：左圖從上到下依次為IR組、Ad-R組、A柱狀圖，與IR組相比，★P<0.05第三部分ELISA測(cè)定大鼠心肌ELISA測(cè)定的大鼠缺血再灌注前后心3所示，與Sham組相比，缺血再灌注損增多，但是IR組與Ad-G組較Sham組顯....

本文編號(hào)：3972979