目的：構(gòu)建漢灘病毒重組腺病毒疫苗并分析其誘導的免疫效果，探索發(fā)展新型 的漢灘病毒疫苗。 方法： 1． 分別擴增和克隆漢灘病毒的M基因、G1和G2基因并進行序列分析。用桿狀 病毒載體表達上述基因編碼的重組蛋白。 2． 用腺病毒載體構(gòu)建重組腺病毒vAd-G1、 vAd-G2及vAd-M，用Western blotting等方法鑒定目的基因的表達。 3． 采用重組腺病毒單獨免疫、重組腺病毒與DNA疫苗聯(lián)合免疫的方法接種小 鼠，用ELISA、ELISPOT、流式細胞分析等技術觀察誘導的體液免疫、細胞免疫和黏 膜免疫反應。用表達漢灘病毒M片段的重組痘病毒攻擊免疫的地鼠，分析重組腺病 毒疫苗誘導的保護效果。 結(jié)果： 1． 用桿狀病毒表達系統(tǒng)在昆蟲細胞中成功表達了漢灘病毒G1和G2蛋白。表達 的重組蛋白與病人血清和用滅活病毒免疫的兔血清均發(fā)生特異性反應。結(jié)果表明， 表達的蛋白具有良好的抗原性。 2． 漢灘病毒重組腺病毒疫苗免疫動物能誘導特異的免疫應答。重組腺病毒 vAd-M誘導出較高水平的中和抗體和細胞免疫應答。重組腺病毒單獨或與重組DNA 疫苗聯(lián)合免疫小鼠，均能誘導出特異的體液免疫、細胞免疫和黏膜...

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1一1PCR擴增76一118株M、Gl及GZ片段

R鑒定陽性克隆，提取質(zhì)粒DNA，酶切分析鑒明書進行。將所得到的重組質(zhì)粒分別命名為析定的陽性克隆各取兩個進行序列測定，測序生物公司進行。因的PCR擴增76一118株M片段全長3616bp，為單一的開放膠電泳，結(jié)果表明，所擴增的M片段全長約擴增長度約1.4Kb，均與理論推測結(jié)果一致。....

圖1一2陽性克隆的酶切鑒定

6.76一11SM500bP圖1一1PCR擴增76一118株M、Gl及GZ片段2.2陽性克隆的酶切分析鑒定切膠回收目的片段克隆至pMD18一T載體，提取陽性克隆質(zhì)粒DNA，根據(jù)VectorNTI6.0軟件對M片段的酶切位點分析，結(jié)合pMD18一載體的物理圖譜，應用不同的限制性內(nèi)切....

圖1一5重組桿狀病毒的PCR鑒定

增出4330bp(2430+1700)和3830bp(2430+1400)左右的特異片段，整合了空質(zhì)粒pFastBacHTb的克隆，則PCR將僅擴增出2430bp左右的片段，重組病毒構(gòu)建模式圖見圖1一4。結(jié)果在PCR產(chǎn)物的核酸電泳圖中的確出現(xiàn)了兩條特異性擴增帶，而且大小與預期相吻....

圖1一8western一b1Ot檢測目的蛋

博士學位論文漢灘病毒重組腺病毒疫苗的基礎研究圖1一7昆蟲細胞表達蛋白檢側(cè)兔血清的ELISA結(jié)果注:(+)指檢測陽性兔多抗，(一)檢測正常兔2.5表達蛋白的Western一blot檢測將重組桿狀病毒vB一G1和vB一G2分別以MOI一5一10感染昆蟲細胞Sfg，72h后細胞發(fā)生嚴重....

本文編號：3923230