發(fā)布時間：2024-02-23 17:58

　　哺乳動物受精過程中,卵子表面的透明帶3(ZP3)蛋白作為精子初級受體,參與精子與卵子的結合并誘發(fā)頂體反應。ZP3特異性抗體能夠與天然的ZP3結合從而阻斷精卵結合導致不育。利用ZP3作為抗原制備的疫苗來誘導免疫不育是人類理想的避孕手段,也是控制動物生育的人道之選。長期以來,人們嘗試利用不同類型的不育疫苗、發(fā)送途徑及免疫佐劑增強ZP3疫苗的免疫反應,以開發(fā)出高效的避孕疫苗。DNA疫苗是一種安全、廉價、易于生產(chǎn)及保存的疫苗類型,在病毒性疾病的預防和控制方面得到了廣泛的應用。本實驗室前期的研究結果表明,肌肉注射和滴鼻免疫鼠ZP3 (mZP3) DNA疫苗均能導致小鼠不育,但DNA疫苗激發(fā)的體液免疫反應較弱,需要通過添加免疫佐劑來增強免疫不育的效果。增強樹突狀細胞(dendritic cells, DCs)對DNA疫苗的遞呈效率,是提高DNA疫苗免疫原性的關鍵。粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor, GM-CSF)能夠促進包括DCs在內(nèi)的抗原遞呈細胞(antigen presenting cells, APC...

【文章頁數(shù)】：125 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖３?ＧＭ－ＣＳＦ和ＦＩｔ３Ｌ對ＤＣ免疫原性相互影響的分子解釋??通過激活ＳＴＡＴ３，?Ｆ怕Ｌ促進了?１ＤＯ的表達抑制了?ＮＦ－ｋＢ和ＭＨＣ－ＩＩ的表達，因此抑制了?ＤＣ的??免疫原性

ＧＭ－ＣＳＦ誘導的信號通路起始于ＪＡＫ２，通過激活ＳＴＡＴ５間接活化ＮＦ－ｋＢ或直接活??化ＮＦ－ｋＢ來促進ＤＣｓ發(fā)育，尤其促進遷移性ＤＣｓ的發(fā)育及致免疫活性，增強機體的固??有免疫應答。該核也信號通路中ＳＴＡＴ５和ＮＦ－ｋＢ是關鍵的信號分子（圖３）?Ｗ。??ＳＴＡＴ５能夠促進人....

圖２重組質(zhì)粒在小鼠巧臟內(nèi)的瞬時表達??高壓水動力轉(zhuǎn)染化后提取贓臟ｍＲＮＡ反轉(zhuǎn)錄，并Ｗ?ｃＤＮＡ及未經(jīng)反轉(zhuǎn)錄的ＲＮＡ作為對照，??

出４０４ｂｐ的目的條帶，而其它陰性對照或經(jīng)ＰＣＤＮＡ３．０轉(zhuǎn)染后的肝臟ｃＤＮＡ均沒有出現(xiàn)??目的條帶。該結果表明，ｐｃＤ－ＧＭ－ＣＳＦ質(zhì)粒能夠在真核細胞中表達，可Ｗ用于后期的免??疫接種實驗（圖２）。??ｉＨＩ??圖２重組質(zhì)粒在小鼠巧臟內(nèi)的瞬時表達??高壓水動力轉(zhuǎn)染化后提取贓臟ｍ....

圖３?ｐｃＤ－ｍＺＰ３質(zhì)粒雙酶切結果??攜帶ｐｃＤ－ｍＺＰ３的菌液涂布ＬＢ板后挑取單克隆經(jīng)ＥｃｏＲＩ和Ｘｂａｌ雙酶切鑒定：１，ｐｃＤ－ｍＺＰ３質(zhì)??

用于免疫的ｍＺＰ３ＤＮＡ疫苗（ｐｃＤ－ｍＺＰ３）質(zhì)粒由本實驗室前期構建并保存ｔＷ。將??攜帶ｐｃＤ－ｍＺＰ３質(zhì)粒的大腸桿菌復蘇并大量擴増后用堿裂解法提取質(zhì)粒ＤＮＡ，并用雙??酶切鑒定，經(jīng)１％瓊脂糖電泳檢測可見１２００ｂｐ左右目的條帶（圖３）。??３３??

圖５?ｐｃＤ－?ＧＭ－ＣＳＦ促進脾臟ＡＰＣｓ成熟??ＲＴ－ＰＣ民檢測共刺激因子ＣＤ８０，ＣＤ８３ＣＤ８６在贓臟中的表達

激因子ＣＤ８０，?ＣＤ８３，?ＣＤ％的表達情況。與未注射ｐｃＤ－ＧＭ－ＣＳＦ組相比，ｐｃＤ－ＧＭ－ＣＳＦ??提前４ｄ處理或與ｐｃＤ－ｍＺＰ３同時注射均能促進脾臟組織中ＣＤ８０，?ＣＤ８３和ＣＤ８６分子??的上調(diào)表達。而ｐｃＤ－ＧＭ－ＣＳＦ＋ｐｃＤ－ｍＺＰ３注射組共刺激因子的表達水....

本文編號：3907745