目的:探討核仁素在血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)表型轉(zhuǎn)化中的作用。方法:以AngⅡ誘導(dǎo)大鼠VSMCs表型轉(zhuǎn)化為模型,觀察AngⅡ?qū)SMCs表型轉(zhuǎn)化標(biāo)志物α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、鈣調(diào)理蛋白(calponin)、平滑肌蛋白22α(SM22α)和骨橋蛋白(OPN)mRNA和蛋白表達(dá)的影響,并觀察VSMCs表型轉(zhuǎn)化時(shí)核仁素mRNA和蛋白的時(shí)空表達(dá)模式;進(jìn)一步采用核仁素基因轉(zhuǎn)染及RNA干擾技術(shù)觀察核仁素對(duì)上述VSMCs表型轉(zhuǎn)化標(biāo)志物mRNA和蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:不同濃度的AngⅡ刺激VSMCs不同時(shí)間后,VSMCs收縮表型標(biāo)志物α-SMA、calponin和SM22α的mRNA和蛋白表達(dá)逐漸減少,而合成表型標(biāo)志物OPN的mRNA和蛋白表達(dá)逐漸增加(P<0.05);不同濃度AngⅡ刺激VSMCs不同時(shí)間后,隨著時(shí)間和劑量增加,核仁素的mRNA和蛋白表達(dá)在一定程度上逐漸升高;AngⅡ可誘導(dǎo)核仁素從細(xì)胞核向細(xì)胞漿移位;核仁素過(guò)表達(dá)可促進(jìn)Ang II誘導(dǎo)的VSMCs表型轉(zhuǎn)化,核仁素表達(dá)下調(diào)后,其促進(jìn)表型轉(zhuǎn)化作用被解除。結(jié)論:核仁素具有促進(jìn)Ang II誘導(dǎo)的...

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【文章目錄】：
材 料 和 方 法
    1 細(xì)胞培養(yǎng)
    2 主要試劑
    3 方法
        3.1 細(xì)胞核蛋白、胞漿蛋白的分離以及細(xì)胞總蛋白的提取
        3.2 細(xì)胞總RNA的提取,逆轉(zhuǎn)錄和RT-qPCR分析
        3.3 間接細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)核仁素的定位
        3.4 Western blot實(shí)驗(yàn)
        3.5 pcDNA3.1-Nuc/siRNA-Nuc重組質(zhì)粒的擴(kuò)增和提取
        3.6 細(xì)胞的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
    4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié) 果
    1 AngⅡ?qū)SMCs表型轉(zhuǎn)化的影響
    2 AngⅡ?qū)ρ芷交〖?xì)胞中核仁素表達(dá)的影響
    3 核仁素過(guò)表達(dá)對(duì)Ang II誘導(dǎo)的VSMCs表型轉(zhuǎn)化的影響
    4 敲減核仁素表達(dá)對(duì)Ang II誘導(dǎo)的VSMCs表型轉(zhuǎn)化的影響
討 論



本文編號(hào)：3862125