發(fā)布時(shí)間：2022-11-09 21:49

　　目的評(píng)價(jià)結(jié)核分枝桿菌基因Rv2660c、Rv2460c、Rv3875和Rv3804c的細(xì)胞表位融合蛋白的免疫原性,為研制新型多階段結(jié)核疫苗提供可靠的靶抗原。方法將Rv2660c、Rv2460c、Rv3875和Rv3804c基因中的細(xì)胞表位串聯(lián)構(gòu)成融合抗原基因（命名為msv）,克隆到原核表達(dá)載體pEASY-Blunt E1中,誘導(dǎo)表達(dá)后采用親和層析純化表達(dá)產(chǎn)物,經(jīng)SDS-PAGE和Western blot鑒定后,用純化的融合抗原蛋白免疫小鼠,ELISA法檢測(cè)免疫小鼠的特異性抗體滴度;分離免疫小鼠的脾淋巴細(xì)胞,采用淋巴細(xì)胞增殖法檢測(cè)其免疫原性。結(jié)果成功構(gòu)建了能表達(dá)融合抗原基因msv的原核表達(dá)質(zhì)粒;SDS-PAGE和Western blot結(jié)果表明,表達(dá)產(chǎn)物親和層析純化后,獲得相對(duì)分子質(zhì)量為41.3×10~3的目的蛋白;ELISA檢測(cè)免疫小鼠血清抗體滴度,結(jié)果表明特異性抗體效價(jià)約為1∶81 920;淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,抗原致敏的淋巴細(xì)胞經(jīng)融合蛋白msv刺激后明顯增殖。結(jié)論成功表達(dá)并純化出融合蛋白msv,該融合蛋白可誘導(dǎo)小鼠特異性抗體表達(dá)和刺激細(xì)胞免疫應(yīng)答,可作為結(jié)核疫苗的抗原組分。 

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 方法
        1.2.1 結(jié)核分枝桿菌融合基因msv的合成
        1.2.2 融合抗原基因msv的擴(kuò)增
        1.2.3 融合抗原基因msv原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.4 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)、鑒定及純化
        1.2.5 動(dòng)物免疫
        1.2.6 免疫小鼠抗體水平檢測(cè)
        1.2.7 淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        1.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.2 融合蛋白的表達(dá)與純化
    2.3 免疫小鼠血清特異性抗體滴度
    2.4 免疫小鼠抗原特異性淋巴細(xì)胞增殖
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]用小鼠模型分析可溶性表達(dá)結(jié)核分枝桿菌Ag85A的免疫原性[J]. 徐正中,胡婷,劉澤,沈軒云,劉佳瑩,殷月蘭,孫林,陳祥,焦新安.  微生物學(xué)報(bào). 2016(05)
[2]牛源多殺性巴氏桿菌融合基因pm0979-PlpE的表達(dá)及其融合蛋白的免疫效果[J]. 馬建偉,李春明,馮思源,杜慧慧,彭遠(yuǎn)義.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2015(10)
[3]結(jié)核分枝桿菌Rv2460c基因的克隆,表達(dá)及編碼產(chǎn)物的免疫特性分析[J]. 康月茜,張春燕,穆柳青,盧楠,楊春,李岱容.  中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2015(06)
[4]結(jié)核疫苗優(yōu)勢(shì)抗原ESAT6、CFP10的分子生物學(xué)基礎(chǔ)及應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 范琴,鮑朗.  生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2012(02)
[5]大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的影響因素[J]. 許崇利,楊梅,許崇波.  中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2010(08)



本文編號(hào)：3704955