目的研究紫杉醇（PTX）通過miR-140對TGF-β1/Smad3信號通路的調(diào)控作用,探討PTX抗肺纖維化的作用機制。方法A549細胞和原代肺泡Ⅱ型上皮細胞（AEC Ⅱ）,用TGF-β1（5ng/mL）培養(yǎng)72h誘導(dǎo)上皮細胞向間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化（EMT）,建立肺纖維化細胞模型,用低濃度PTX （10nM,50nM）和（或）轉(zhuǎn)染miR-140加以干預(yù)。透射電鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)變化,激光掃描共聚焦顯微鏡（LSCM）檢測vimentin、E-cadherin和特異性肺表面活性蛋白C （SP-C）的表達變化,流式細胞儀測定細胞轉(zhuǎn)染率。SD大鼠,經(jīng)氣管注入博來霉素（BLM）建立肺纖維化動物模型,BLM注入后第15天開始加PTX （0.6mg/kg·d-1）干預(yù),HE及Masson染色觀察肺組織病理變化,ELISA法檢測Ⅰ型膠原蛋白,酸水解法檢測羥脯氨酸,免疫組化法檢測Smad3、p-Smad3和α-SMA表達。Western blot及real-time RT-PCR檢測vimentin、 E-cadherin、α-SMA、Smad3和p-Smad3等蛋白和mRNA的表達,]-eal-time R... 

【文章來源】：濱州醫(yī)學(xué)院山東省

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

原代AECII的細胞形態(tài)學(xué)和SP-C檢測（bar=150inupper,50inlower)

濱州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 肺組織HE、MASSON染色觀察：Od及sham組的肺組織結(jié)構(gòu)未見明顯異常。BLM7d組，可見肺泡上皮細胞損傷、變性，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，肺間質(zhì)膠原含量增多，肺組織開始出現(xiàn)纖維化。BLM28d組，可見肺泡結(jié)構(gòu)破壞更為嚴(yán)重，肺泡間隔明顯增寬，病變區(qū)膠原纖維成斑片狀分布，纖維化程度嚴(yán)重。PTX干預(yù)組：肺泡結(jié)構(gòu)僅見輕度紊亂，肺間質(zhì)膠原沉積量較BLM28d組明顯好轉(zhuǎn)（圖7)。提示PTX可有效改善肺組織纖維化。Od 76 28d PTX sham

工:‘MS身養(yǎng)編_翁__■國顯圖7.肺組織的HE染色和Masson三色染色（bar=150叩i)。肺組織經(jīng)BLM處理后，肺纖維化程度隨時間延長而逐漸加重，CO丨丨ageni和輕脯氨酸含量隨纖維化程度的加重而逐漸增加。28d時肺纖維化顯著，collagen I含量較Od組高約8倍，經(jīng)脯氨酸含量較Od組高約7倍，但經(jīng)PTX干預(yù)后，collagenI及輕脯氨酸含量較BLM 28d組分別下降了約35%和40%(圖8)。本實驗中BLM成功誘發(fā)大鼠肺組織纖維化，并且PTX可明顯改善BLM誘導(dǎo)的肺纖維化。


本文編號：2988135