一、研究背景和目的肉毒梭菌（Clostridium botulinum）是一種厭氧的、革蘭氏陽性的孢子形成菌,肉毒毒素（botulinum neurotoxin,BoNT）是由肉毒梭菌分泌的一種神經(jīng)毒素,是所發(fā)現(xiàn)的生物毒素和化學(xué)毒素中毒性最強的物質(zhì),它可以作用于周圍運動神經(jīng)末梢,神經(jīng)肌肉接點即突觸處,抑制突觸前膜釋放神經(jīng)介質(zhì)-乙酰膽堿,從而引起肌肉松馳性麻痹[1]。食品污染、嬰兒腸道感染及傷口感染是引起人類肉毒毒素中毒的主要原因[2]。肉毒毒素共包含A-G七種血清型,A、B型是人類肉毒中毒的常見型別,E、F型偶爾引起食物中毒流行,C、D型則僅引起動物中毒,G型極少見。各型肉毒毒素分子在結(jié)構(gòu)和功能上有很多相似的特點：均由重鏈（H鏈,相對分子質(zhì)量為100KD）和輕鏈（L鏈,相對分子質(zhì)量為50KD）組成,二者由1個二硫鍵連接。重鏈的羧基末端（Hc）,又稱為受體結(jié)合區(qū),它負(fù)責(zé)與靶細胞的結(jié)合；重鏈N端（HN結(jié)構(gòu)域）為一個跨膜轉(zhuǎn)運功能區(qū)域,而輕鏈具有鋅離子肽鏈內(nèi)切酶活性。結(jié)合、轉(zhuǎn)運和催化這3個功能區(qū)域呈線性排列,轉(zhuǎn)運區(qū)域位于中間[3]。催化區(qū)域為由α-螺旋和β-折疊組成的緊實的球形結(jié)構(gòu),轉(zhuǎn)運區(qū)域主... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
    1 研究目的和意義
    2 肉毒毒素研究進展
        2.1 毒素的來源和分布
        2.2 肉毒毒素的理化性質(zhì)和提取方法
        2.3 肉毒毒素結(jié)構(gòu)和作用方式
        2.4 BoNT檢測及預(yù)防
        2.5 肉毒毒素中毒特點和預(yù)防
第一章 A型肉毒毒素重鏈C末端保護性抗原的制備
    1.1 材料
        1.1.1 網(wǎng)上GeneBank檢索獲得A型肉毒毒素的蛋白序列及三維立體結(jié)構(gòu)
        1.1.2 DNASTAR蛋白分析軟件
        1.1.3 B細胞表位優(yōu)勢區(qū)域的平均抗原性指數(shù)（AI）評分標(biāo)準(zhǔn)
        1.1.4 網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器分析系統(tǒng)ExPasy系統(tǒng)
    1.2 方法
        1.2.1 A型肉毒毒素重鏈C末端抗原表位的預(yù)測
        1.2.2 A型肉毒毒素重鏈C末端抗原多肽的合成
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 A型肉毒毒素重鏈C末端抗原表位的預(yù)測
        1.3.2 合成多肽的質(zhì)譜分析結(jié)果
    1.4 討論
第二章 BoNT/A抗原表位單克隆抗體的制備與檢測
    2.1 材料
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 儀器設(shè)備
        2.1.3 細胞
        2.1.4 培養(yǎng)基和緩沖液
    2.2 方法
        2.2.1 多肽合成抗原的制備
        2.2.2 小鼠免疫
        2.2.3 飼養(yǎng)細胞的制備
        2.2.4 脾淋巴細胞的制備
        2.2.5 髓瘤細胞的準(zhǔn)備
        2.2.6 細胞融合
        2.2.7 融合細胞的培養(yǎng)
        2.2.8 篩選（Screening）
        2.2.9 克�。–loning）
        2.2.10 體外擴大培養(yǎng)
        2.2.11 細胞凍存
        2.2.12 小鼠腹水制備
        2.2.13 腹水抗體效價的測定
        2.2.14 亞類鑒定
        2.2.15 腹水抗體的純化
        2.2.16 抗體純度的鑒定
        2.2.17 蛋白絕對含量測定
        2.2.18 抗體效價測定
        2.2.19 抗體特異性檢測
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 細胞融合
        2.3.2 雜交瘤克隆化結(jié)果
        2.3.3 單抗分型
        2.3.4 抗體效價測定
        2.3.5 單抗純化結(jié)果
        2.3.6 穩(wěn)定性實驗
        2.3.7 抗體特異性檢測
    2.4 討論
        2.4.1 融合和陽性株篩選
        2.4.2 關(guān)于單抗的純化方法
        2.4.3 肉毒毒素研究存在的問題
第三章 全文小結(jié)
參考文獻
英文縮略詞表
碩士期間完成的論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]A型肉毒毒素保護性抗原基因的克隆及其結(jié)構(gòu)分析[J]. 王慧,蔭俊,袁斌,何君,王忠澤.  生命科學(xué)研究. 2001(04)
[2]人DAO氨基酸序列片段B-細胞表位的多參數(shù)預(yù)測[J]. 陳興,王更銀,叢愛麗,張立,許素菊.  免疫學(xué)雜志. 2000(03)
[3]蛋白順序性抗原決定簇的多參數(shù)綜合預(yù)測[J]. 萬濤,孫濤,吳加金.  中國免疫學(xué)雜志. 1997(06)
[4]PCR 檢測產(chǎn) A、B、E、F 和 G 型肉毒神經(jīng)毒素梭菌的神經(jīng)毒素基因[J]. 王穎群,嚴(yán)共華,雷祚榮.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 1997(03)
[5]A new approach for B-cell epitope prediction in viral proteins[J]. 吳玉章,朱錫華.  Chinese Science Bulletin. 1995(09)
[6]治療用A型肉毒結(jié)晶毒素的研制及實驗動物模型的建立[J]. 王蔭椿,張暉,黃保國,戴壯.  生物制品學(xué)雜志. 1990(03)
[7]肉毒中毒—“察布查爾病”的調(diào)查報告[J]. 吳朝仁,連志浩,陳文俊,劉玉璋,梁秀,李文惠,成勛,趙懷桂.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 1958 (10)



本文編號：2899199