目的:構(gòu)建能穩(wěn)定表達(dá)膜錨定Gaussia熒光素酶(GLuc)的載體,以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞自發(fā)光成像。方法:采用人源表皮生長因子受體(EGFR)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體(MCSFR)、白細(xì)胞介素-4受體α鏈(IL4Rα)信號(hào)肽將GLuc的信號(hào)肽替換掉,并在GLuc后分別加上EGFR、MCSFR及IL4Rα的跨膜結(jié)構(gòu)域,構(gòu)建表達(dá)膜錨定的GLuc的載體,用慢病毒感染的方法將其導(dǎo)入永生化的小鼠外周血來源巨噬細(xì)胞(iBloodMC),通過在細(xì)胞和培養(yǎng)上清中加入GLuc底物檢測發(fā)光,從而檢測GLuc的表達(dá)。結(jié)果:iBloodMCGLuc-EGFR和iBloodMCGLuc-IL4Rα均能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶,且iBloodMCGLuc-EGFR的GLuc表達(dá)量較高,EGFR將GLuc錨定在膜上效果較好。結(jié)論:表達(dá)膜錨定GLuc的載體構(gòu)建成功,將其導(dǎo)入細(xì)胞,加入底物可實(shí)現(xiàn)細(xì)胞自發(fā)光成像。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 儀器與試劑
    1.2 表達(dá)膜錨定熒光素酶慢病毒載體構(gòu)建
    1.3 表達(dá)膜錨定熒光素酶的慢病毒包裝
    1.4 永生化外周血來源巨噬細(xì)胞培養(yǎng)及感染
    1.5 細(xì)胞體外成像檢測
2 結(jié)果
    2.1 慢病毒感染永生化小鼠外周血來源巨噬細(xì)胞結(jié)果
    2.2 發(fā)光成像結(jié)果
3 結(jié)論

【參考文獻(xiàn)】

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1 樸春梅;邱淑蘭;劉颯;王綠婭;杜杰;;小動(dòng)物活體成像生物發(fā)光穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年06期

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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