目的:研究二甲雙胍(metformin,Met)對脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導的大鼠心肌細胞H9C2損傷的保護作用及機制。方法:心肌細胞H9C2按照不同處理方式分為對照組、LPS組及3種不同濃度Met與LPS聯(lián)合培養(yǎng)組。培養(yǎng)24 h后采用MTT法測定各組細胞活力,流式細胞技術(shù)檢測各組細胞凋亡和活性氧水平,蛋白質(zhì)印跡法檢測各組Caspase3、BCL2、BAX、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine 5′-monophosphate-activated protein kinase,t-AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphorylated adenosine 5′-monophosphate-activated protein kinase,p-AMPK)、Beclin1、Parkin的蛋白表達。結(jié)果:和LPS單獨處理組相比,Met與LPS聯(lián)合培養(yǎng)降低了LPS誘導的細胞活力增強和細胞凋亡增多,降低了BCL2、BAX蛋白表達,Caspase3表達未降低;p-AMPK、Beclin1、Parkin蛋白表達增加,細胞活性氧水平降低。結(jié)論:Met可能通過活化AMPK途徑,增加細胞自噬、減少活性氧產(chǎn)生,減輕脂多糖對細胞的損傷,保護心肌細胞。
【部分圖文】：

Q3PIA105104103102102103104105FITCAQ4Q2Q1Q3PIA105104103102102103104105FITCAQ4Q2Q1Q3凋亡率（%）LPS+Met（1mmol/L）組LPS組對照組*20*151050**ABCDEFA：對照組；B：LPS組；C：LPS+Met（1mmol/L）組；D：LPS+Met（2mmol/L）組；E：LPS+Met（5mmol/L）組；F：各組細胞凋亡率定量分析。兩組比較，*P＜0.01（n=3）。圖2Met對細胞凋亡的影響Figure2TheeffectofmetforminonapoptosisofH9C2cellsLPS+Met（2mmol/L）組LPS+Met（5mmol/L）組00000··1300

H9C2細胞自噬蛋白減少。1mmol/LMet顯著逆轉(zhuǎn)了LPS引起的自噬蛋白Beclin1和Parkin的降低（P＜0.01，圖5），而給予2mmol/L、5mmol/LMet處理后，Beclin1表達隨著Met濃度升高而下降，但均顯著高于LPS誘導組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。最終蛋白相對含量均以目的蛋白/GAPDH校正。2.6Met對H9C2細胞內(nèi)ROS生成的影響通過流式細胞術(shù)檢測細胞內(nèi)ROS的表達含量。LPS組細胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生量明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01，圖6）；1mmol/LMet顯著降低細胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生（P＜0.01），2mmol/L、5mmol/LMet同樣可以降低LPS引起的ROS含量的升高。3討論膿毒癥導致心肌損傷的機制還未完全明確，膿毒癥損傷心肌組織的結(jié)構(gòu)和功能，目前認為可能與線粒體功能障礙、氧化應(yīng)激等有關(guān)［13-14］。Met是臨床用于治療2型糖尿并肥胖型多囊卵巢綜合征的常用藥，可降低2型糖尿病患者心血管疾病的發(fā)生率。Met對肺癌等多種腫瘤細胞也有促凋亡及抑A：Westernblot檢測Caspase3、BCL2、BAX的表達；B：Caspase3蛋白相對表達水平；C：BCL2蛋白相對表達水平；D：BAX蛋白相對表達水平。兩組比較，*P＜0.01（n=3）。圖3Met對細胞凋亡相關(guān)蛋白表達的影響Figure3TheeffectofmetforminontheexpressionofproteinsrelatedtocellapoptosisCaspase3BCL2BAXGAPDHMet（mmol/L）LPS--125-++++36kDa21kDa26kDa17kDaCaspase3蛋白相對表達水平*1.51.00.50LPS+Met（1mmol/L）組LPS組對

3.4%0Count3002001000102103104105FITCAFITCAsubset54.2%0Count3002001000102103104105FITCAFITCAsubset5.46%0ROS表達率（%）**806040200ABCDEF**LPS+Met（1mmol/L）組LPS組對照組A：對照組；B：LPS組；C：LPS+Met（1mmol/L）組；D：LPS+Met（2mmol/L）組；E：LPS+Met（5mmol/L）組；F：各組細胞ROS水平定量分析。兩組比較，*P＜0.01（n=3）。圖6Met對細胞內(nèi)ROS產(chǎn)生的影響Figure6TheeffectofmetforminonthecellularROSgeneratedLPS+Met（2mmol/L）組LPS+Met（6mmol/L）組··1302
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