第一部分:小鼠胚胎干細(xì)胞的體外培養(yǎng) 目的:胚胎干(ES)細(xì)胞是從早期胚胎中分離出來(lái)的全能細(xì)胞系,體外培養(yǎng)時(shí)可維持其發(fā)育的全能性、未分化狀態(tài)和正常的二倍體核型,能發(fā)育為含外、中、內(nèi)三個(gè)胚層的胚胎體,在體內(nèi)能參與包括生殖系的嵌合體。ES細(xì)胞可作方研究細(xì)胞定向分化、多發(fā)育潛能及細(xì)胞發(fā)育分化機(jī)制的模型,并有望應(yīng)用于細(xì)胞和基因治療領(lǐng)域,從而引起人們的廣泛興趣。ES細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件比較嚴(yán)格,不僅要保持其擴(kuò)增、增殖的能力,而且要維持其未分化的特性。本部分以原代小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(PMEF)或白血病抑制因子(LIF)與ES細(xì)胞系共培養(yǎng)方法來(lái)體外擴(kuò)增ES細(xì)胞,為以后的研究工作打下基礎(chǔ)。 方法:本研究利用小鼠的ES-D3細(xì)胞系作為研究對(duì)象。首先取孕13-14天的胎鼠組織制備PMEF作為飼養(yǎng)層,經(jīng)絲裂霉素-C滅活后用于ES細(xì)胞的培養(yǎng),將ES-D3細(xì)胞分別培養(yǎng)于PMEF上或含LIF的ES細(xì)胞培養(yǎng)基中,培養(yǎng)基為高糖DMEM,內(nèi)含體積分?jǐn)?shù)20%胎牛血清、1%非必需氨基酸、0.1 mmol/L β-巰基乙醇和2 mmol/L谷氨酰胺。觀察在此兩種條件下,ES-D3細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況和克隆形成情況。 結(jié)果:在存在PMEF或有LIF時(shí),體外均支持ES細(xì)胞的生長(zhǎng)擴(kuò)增。但兩種
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R329
【部分圖文】：

四、ES細(xì)胞克隆的消化ES細(xì)胞克隆經(jīng)胰蛋白酶.EDTA作用后，其結(jié)構(gòu)致密的克隆逐漸變得松散，自克隆的外層逐漸脫落，可被消化為單個(gè)細(xì)胞。見(jiàn)圖I一6。圖I一1:剛貼壁時(shí)的P側(cè)田F(ZOX)圖I一2:半?yún)R合時(shí)的P州田F(20x)圖I一3:完全融合的PME(r20X)圖14:Es細(xì)胞在PMEF上的鳥(niǎo)巢狀克隆(20x)圖I一5:Es細(xì)胞在無(wú)PN田F時(shí)的克隆(20X)圖I石:Es細(xì)胞克隆的消化(20x)

四、ES細(xì)胞克隆的消化ES細(xì)胞克隆經(jīng)胰蛋白酶.EDTA作用后，其結(jié)構(gòu)致密的克隆逐漸變得松散，自克隆的外層逐漸脫落，可被消化為單個(gè)細(xì)胞。見(jiàn)圖I一6。圖I一1:剛貼壁時(shí)的P側(cè)田F(ZOX)圖I一2:半?yún)R合時(shí)的P州田F(20x)圖I一3:完全融合的PME(r20X)圖14:Es細(xì)胞在PMEF上的鳥(niǎo)巢狀克隆(20x)圖I一5:Es細(xì)胞在無(wú)PN田F時(shí)的克隆(20X)圖I石:Es細(xì)胞克隆的消化(20x)

四、ES細(xì)胞克隆的消化ES細(xì)胞克隆經(jīng)胰蛋白酶.EDTA作用后，其結(jié)構(gòu)致密的克隆逐漸變得松散，自克隆的外層逐漸脫落，可被消化為單個(gè)細(xì)胞。見(jiàn)圖I一6。圖I一1:剛貼壁時(shí)的P側(cè)田F(ZOX)圖I一2:半?yún)R合時(shí)的P州田F(20x)
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本文編號(hào)：2874166