目的：IL-12是一種具有免疫調(diào)節(jié)功能的細胞因子，在細胞介導的免疫反應中起著關鍵作用。本實驗試圖研究1)IL-12是否能誘導T細胞凋亡；2)那些信號傳導通路參與了凋亡誘導過程：3)T細胞那些表面分子是凋亡的效應者；4)在抗原誘導的免疫反應中，IL-12如何調(diào)節(jié)T細胞凋亡：5)IL-12誘導T細胞凋亡對T細胞功能亞群的影響。 材料方法：T細胞取自健康自愿者和骨髓移植后+14、+21、+60天慢粒患者，給予不同濃度(10-100ng／ml)IL-12處理后，Annexn V或TUNNEL法測細胞凋亡。表面分子標志(CD25、CD95、FasL、TNFR)分別用FITC、PE、生物素標記后上流式細胞儀檢測，同時用半定量RT-PCR測FasL mRNA表達。正常T細胞與自體或異基因B細胞(Raji)混合培養(yǎng)，加入IL-12(50ng／ml)處理后，用流式細胞儀測定。測凋亡率(TUNNEL法)和表面分子CD25、CD95、FasL、TNPR。骨髓移植后+14、+21和+60天患者血中T細胞加入IL-12及信號傳導抑制劑培養(yǎng)后，上流式細胞儀檢測凋亡表面分子表達與T細胞亞群變化，免疫酶聯(lián)雙夾心法測IFN-r和IL-4滴度。 結(jié)果： 1、不論有無抗原刺激IL-12可以誘導T細胞凋亡，凋亡率與IL-12劑量，作用時間成正相關。 2、在誘導凋亡過程細胞表面CD25和FasL表達增高，F(xiàn)as和TNFR變化不大，(p＞0.05) 3、半定量RT-PCR檢測顯示FasLmRNA表達亦上調(diào)。 4、Caspase-3抑制試驗證明凋亡效應依賴于Caspare-3活性。 5、加入PTK、PKC和PKA信號傳導抑制劑后均可使FasL表達下調(diào)。但不影響CD25表達。 6、骨髓移植后供體T細胞在IL－12作用下亦可被誘導凋亡，同時T細胞 亞群CD4AIDS比例增高，IFN－r滴度升高，IL－4滴度下降。 結(jié)論： l、IL．12可誘導T細胞凋亡。誘導凋亡效應呈時間和劑量依賴性。 2、IL－12可增加 T細胞表面分子 CD25表達率，提示幾－12可使T細胞活 化增殖。 3、IL－12增加 T細胞表面 FasL表達，但對 Fas和 TNFR無明顯作用，IL－12 通過Fa，F(xiàn)asL途徑誘導凋亡。 4、Caspase習抑制試驗證明 IL＊ 對 T細胞的凋亡誘導作用由 Fas＊asL 相互作用介導，并依賴 CAspAs卜3活性。 5、PTK、PKC和 PKA均涉及 IL－12誘導 T細胞凋亡過程。但不能阻斷 CD25表達。說明IL－12對T細胞的誘導活化增殖和誘導凋亡作用是由不同信 號通路傳遞。只有PTK抑制可改變FaL rnRNA表達。 6、IL．12增強 hl免疫反應，增加 T細胞亞群 CD4／CDS比例。提示發(fā)生 凋亡的細胞以CDS＋細胞為主�？赡苡兄跍p輕GVHD。
【學位單位】：暨南大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2002
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

ACD3細胞純度

CHAI004對IL一12作用的阻斷效應
【參考文獻】

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1 徐紅薇,吳長有,李波,任歡,鐘照華,李呼倫,邢淑賢,田景先;IL-12、IL-7、IL-2體外協(xié)同誘導人PBMC增殖和PBMC殺瘤活性的實驗研究[J];中國免疫學雜志;1998年05期

本文編號：2857929