目的改良樹脂包埋復數(shù)小鼠不脫鈣脛骨的方法,提高樹脂包埋法的效率及穩(wěn)定性,探索減少樹脂切片脫片的方法。方法取15只B6小鼠共30脛骨,標記、固定、脫水、滲透后將其包埋于直徑4 mm的圓柱型樹脂塊中,脛骨近端1/4處切斷后再對剩余的3/4脛骨包埋。在包埋時將5個脛骨切面貼于平整樹脂板并包埋于同一樹脂塊中。分別在包埋液制備、切片、染色3個階段隨機將樣本分為對照組及實驗組,分別在3個改良組中采用以下方案處理,包括:向包埋液沖入CO_2;在切面上涂抹包埋液;在脫塑水化前以95℃加熱切片15 min。分析樹脂凝固時間、切片脫片率及骨形成、成骨細胞定量指標。結(jié)果成功包埋6個樹脂塊,每個樹脂塊內(nèi)有5個脛骨,脛骨橫截面于同一平面上,樹脂塊凝固完全,適于切片。向包埋液沖入CO_2可以縮短樹脂塊凝固時間,提高凝固成功率。在切面上涂抹包埋液可以顯著降低切片時的脫片率(P0.05)且不影響骨標記的熒光分析(P0.05)。在脫塑前加熱切片可以顯著降低脫塑水化后的脫片率(P0.05),且不影響成骨細胞定量分析(P0.05)。結(jié)論復數(shù)小鼠不脫鈣脛骨的樹脂包埋改良法有效可行,這可能是一種理想的不脫鈣骨組織研究方法。
【部分圖文】：

貼紙價格昂貴，標本需要低溫保存等缺點而暫時未能廣泛推廣。樹脂包埋切片耗費的時間較長，如果可以在構(gòu)建標本塊時將多個骨樣本按照相同位置包埋固定，切片時的效率就能明顯提高。本實驗室首次探索了復數(shù)脛骨平行包埋的方案，包埋時可以確保所有脛骨切面在同一平面上，切片時位置角度調(diào)整方便高效。與傳統(tǒng)的包埋方式相比，此方案不僅明顯縮短了實驗的耗時，還減少了包埋STIRHEATMagneticstirbarMagneticstirrerDryiceEmbeddingsolution(withoutDMPT)CO2AirCO2AirCO2AirCO2Air0h1h4h8h圖1向包埋液沖入二氧化碳可以縮短包埋液的凝固時間Fig.1FlowingCO2intotheembeddingsolutionreducespolymerizationtime.A:SchematicdiagramofflowingCO2intotheembeddingsolution;B:RepresentpicturesshowingpolymerizationoftheblocksinCO2andairgroupsat0,1,4,and8h.Thepicturesweretakenimmediatelyaftertiltingthevialtoobservetheviscosityandpolymerizationofthesolution;C:NumberofcompletepolymerizedblocksofCO2andAirgroupsovertime(n=10);D:RateofcompletepolymerizedblocksofCO2andAirgroups(n=10).ABC12108642No.0ofcompletpolymerizdblocksCO2Air0148244872DCO2Air100%70%1.21.00.80.60.40.20Ratioofcompletpolymerizdblocks(n=10)ABCD圖2使用兩次包埋的方式可將多個脛骨包埋于同一樹脂塊中Fig.2Multipletibiasembeddedinthesameblockby2-stepembedding.A:Embeddingmultipletibiasinaflintglasstube;B:Trimmingthetibiaatthe1/4proximalpart;C:Embeddingmultipletibiaswhilemaintainingthesectionplaneflat;D:Polymerizedbloc

olymerizationoftheblocksinCO2andairgroupsat0,1,4,and8h.Thepicturesweretakenimmediatelyaftertiltingthevialtoobservetheviscosityandpolymerizationofthesolution;C:NumberofcompletepolymerizedblocksofCO2andAirgroupsovertime(n=10);D:RateofcompletepolymerizedblocksofCO2andAirgroups(n=10).ABC12108642No.0ofcompletpolymerizdblocksCO2Air0148244872DCO2Air100%70%1.21.00.80.60.40.20Ratioofcompletpolymerizdblocks(n=10)ABCD圖2使用兩次包埋的方式可將多個脛骨包埋于同一樹脂塊中Fig.2Multipletibiasembeddedinthesameblockby2-stepembedding.A:Embeddingmultipletibiasinaflintglasstube;B:Trimmingthetibiaatthe1/4proximalpart;C:Embeddingmultipletibiaswhilemaintainingthesectionplaneflat;D:Polymerizedblockwithmultipletibias.http://www.j-smu.comJSouthMedUniv,2019,39(9):1038-1044TimeafterflowingCO2andair(h)··1041

聯(lián)，CO2沖入可PasteUn-pasteUn-pastePaste×10×20Un-pastePaste×20×40ABCNo.ofeffectiveslides***454035302520151050PasteUn-pasteRateofslidesdetachment（%）***PasteUn-paste100%90%80%70%60%50%40%30%20%10%0%MAR（μm/d）n.sPasteUn-pasteBFR/BS（%/d）n.sPasteUn-paste2.52.01.51.00.501.41.21.00.80.60.40.20DE圖3使用包埋液涂抹切面可預防切片時脛骨脫片F(xiàn)ig.3Applicationofembeddingsolutiononthesectionsurfacepreventsslidedetachmentwithoutaffectingcalceinlabelinganalysis.A:RepresentativescanpicturesofPasteandUn-pasteslides(scalebar=1mm);B:Representativeunstainedpasteandnon-pasteslidesundermicroscope(leftpanel:scalebar=200μm;rightpanel:scalebar=100μm);C:Representativefluorescentpicturesofpasteandnon-pasteslides(leftpanel:scalebar=100μm;rightpanel:scalebar=50μm);D:Numberofeffectiveslidesandrateofslidesdetachmentinpasteandnon-pastegroups(***P<0.001,n=6);E:Mineralappositionrate(MAR,μm/d)andboneformationrate(BFR/BS,%/d)inpasteandnon-pastegroups(n.s:P>0.05,n=12).··1042JSouthMedUniv,2019,39(9):1038-1044http://www.j-smu.com
【參考文獻】

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1 孫振;尹合勇;眭翔;余曉明;彭江;王玉;汪愛媛;郭全義;劉舒云;孟昊業(yè);盧世璧;;冰凍切片法觀察不脫鈣骨組織的熒光分布[J];中國修復重建外科雜志;2015年11期

2 李梁;李海燕;霍東升;閆旭升;崔成立;;大鼠股骨頭骨松質(zhì)樹脂包埋體視顯微觀察方法介紹[J];中國臨床解剖學雜志;2015年01期

3 王勇平;李曉琴;張輝;蔣垚;;塑料包埋結(jié)合四環(huán)素熒光標記制作不脫鈣骨組織切片的實驗研究[J];臨床與實驗病理學雜志;2012年05期

4 王東勝;趙征;呂燕;;四種防脫片劑在不脫鈣骨組織切片中的應用研究[J];中華老年口腔醫(yī)學雜志;2011年06期

5 李建赤;黃必留;徐自強;;骨組織形態(tài)計量學在臨床骨病應用中的研究與進展[J];中國組織工程研究與臨床康復;2011年35期

6 譚見容;楊小紅;康寧;王文;陳鴻輝;梁偉國;;應用甲基丙烯酸甲酯包埋不脫鈣骨組織方法的探討[J];中國矯形外科雜志;2009年07期

7 郭澤鴻;容明燈;朱安棣;周磊;;含種植體硬組織骨計量學不脫鈣塑料包埋技術(shù)[J];廣東醫(yī)學;2008年03期

8 梁化印,郭瑞峰,杜雙存,田茹,董紅梅,陳健,楊保凱,韓樹青;塑料切片技術(shù)介紹[J];臨床與實驗病理學雜志;2004年05期

9 呂榮,徐新智,王軍;塑料包埋不脫鈣大塊骨組織切片及染色[J];臨床與實驗病理學雜志;2002年03期

10 劉紹泉;塑料包埋不脫鈣骨組織玻璃刀切片技術(shù)[J];中華病理學雜志;1996年01期

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1 張加廷;張峰;吳志鴻;丁一;叢波;韓龍;張仲文;;光學相干斷層成像在兔膝關(guān)節(jié)軟骨厚度測量中的應用[J];實用放射學雜志;2016年07期

2 孫振;尹合勇;眭翔;余曉明;彭江;王玉;汪愛媛;郭全義;劉舒云;孟昊業(yè);盧世璧;;冰凍切片法觀察不脫鈣骨組織的熒光分布[J];中國修復重建外科雜志;2015年11期

3 高克加;舒怡;肖梅芳;蔡瑾;梅小剛;葉智衛(wèi);張芬芳;朱呂佶;趙國定;;不同雙磷酸鹽藥物在聯(lián)合“骨康靈”治療中對股骨頭壞死的療效研究[J];中國骨質(zhì)疏松雜志;2015年09期

4 華楠;莊晶;;GTR修復牙槽骨缺損的beagle犬動物模型的研究[J];中外醫(yī)療;2015年26期

5 王亞軍;劉梅潔;鞠大宏;劉靜;徐亞莉;劉丁龍;高原;;針刺對去卵巢骨質(zhì)疏松模型大鼠骨密度、骨形態(tài)計量學的影響[J];中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學雜志;2015年07期

6 黃元瑾;劉曙光;楊勃;劉偉珍;張迪;;放療后頜骨骨內(nèi)種植的Beagle犬動物模型的建立[J];廣東牙病防治;2015年05期

7 吳拮;呂榮;孟國林;李靜;劉民;;鈦合金、人工骨材料厚切片再研磨后顯示新生骨-熒光雙標法[J];臨床與實驗病理學雜志;2014年10期

8 陳利;韓麗麗;;一種適用于聚合物薄膜冷凍超薄切片的簡易低溫物理包埋技術(shù)[J];青島科技大學學報(自然科學版);2014年04期

9 邵磊;趙寶紅;;鈦種植體骨結(jié)合界面組織學研究進展[J];中國實用口腔科雜志;2014年07期

10 郭澤鴻;周磊;容明燈;蔣穎;丁婧文;劉偉珍;;純鈦種植體激光-微弧氧化表面處理對早期骨結(jié)合的影響[J];口腔頜面外科雜志;2014年03期

【二級參考文獻】

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1 王勇平;李曉琴;張輝;蔣垚;;塑料包埋結(jié)合四環(huán)素熒光標記制作不脫鈣骨組織切片的實驗研究[J];臨床與實驗病理學雜志;2012年05期

2 龐智暉;魏秋實;周廣全;陳鵬;何偉;白波;李穎;;個體股骨頭壞死三維有限元模型的建立與應用[J];生物醫(yī)學工程學雜志;2012年02期

3 蘇明明;金澎;齊兆鵬;;厚樹脂切片的防脫片方法比較[J];青島大學醫(yī)學院學報;2011年04期

4 徐婷;鐘聲旺;邱冬梅;孫萍;沈長久;;改良多聚-L-賴氨酸法防脫片載玻片的制備[J];南通大學學報(醫(yī)學版);2011年04期

5 吳共發(fā);張彥;薛小磊;趙海燕;何楠;韓慧霞;;四種防脫載玻片使用效果的比較[J];中國組織化學與細胞化學雜志;2011年02期

6 王東勝;劉洪臣;;帶種植體骨磨片技術(shù)[J];中華老年口腔醫(yī)學雜志;2009年06期

7 徐紅;田余祥;孫藝平;徐靜;于德欽;王冬梅;;免疫組化染色防脫片三種方法的比較[J];中國誤診學雜志;2009年30期

8 于德欽;田余祥;陳熙;徐紅;徐靜;王冬梅;;明膠硫酸鉻鉀在腦組織冰凍切片中的防脫片作用[J];大連醫(yī)科大學學報;2009年05期

9 虞杰;顧冬梅;郭臨川;;防脫片劑在免疫組織化學染色中的應用[J];中國血液流變學雜志;2008年03期

10 聶春紅;李洪;朱偉民;朱東;高甲子;;力學加載大小對去勢大鼠骨組織形態(tài)計量學影響的實驗研究[J];生物醫(yī)學工程研究;2008年01期

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3 劉瑋,呂榮,胡蘊玉,王伯沄;皮質(zhì)骨不脫鈣切片法及在免疫組化中的應用[J];臨床與實驗病理學雜志;1988年02期

4 熊正文,黃勇,胡海霞,蘇紅,李春光;微波-EDTA脫鈣技術(shù)在免疫組織化學染色中的應用研究[J];華北國防醫(yī)藥;2003年01期

5 劉同慎,董曉明;對脫鈣骨硫瑾—苦味酸染色法的探討[J];濱州醫(yī)學院學報;1997年06期

6 黃美雅;黃云梅;林燕萍;鄭良樸;;EDTA脫鈣方法的實驗觀察[J];福建中醫(yī)藥;2007年04期

7 熊正文,李宏偉,黃勇,李春光;骨組織脫鈣技術(shù)及在免疫組化染色中的應用[J];中國比較醫(yī)學雜志;2004年03期

8 曾嘉;;甲酸梯密度骨脫鈣法在透射電鏡樣品制備中的應用[J];天津醫(yī)科大學學報;2011年01期

9 黎飚;方曉燕;黃永秩;藍愛榮;;實用的快速骨組織脫鈣法[J];右江民族醫(yī)學院學報;2011年01期

10 楊紅;張亞磊;;蠟塊脫鈣法在常規(guī)病理制片技術(shù)中的應用[J];中國城鄉(xiāng)企業(yè)衛(wèi)生;2016年05期

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