激活素（Activin）是轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β)超家族成員，具有多種生物學(xué)活性，在許多器官和組織均具有重要的作用。Activin受體屬于絲氨酸/蘇氨酸（Ser/Thr）激酶型受體，Activin與細(xì)胞膜上II型受體（ActRII）結(jié)合后，再結(jié)合并磷酸化I型受體（ActRI），進(jìn)而激活下游Smad蛋白，通過Smad蛋白級聯(lián)反應(yīng)將信號傳導(dǎo)入細(xì)胞核，激活相應(yīng)靶基因。 Activin在肝臟疾病發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用，研究表明Activin可誘導(dǎo)肝實質(zhì)細(xì)胞凋亡及促進(jìn)肝星形細(xì)胞（HSC）產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)等，進(jìn)而參與肝纖維化的形成。Activin主要包括Activin A、Activin B和Activin AB三種分子形式，Activin A被研究得最多且與肝臟有關(guān)。在病毒性肝炎、肝纖維化及肝癌等病變中Activin A表達(dá)異常，尤其肝纖維化時可檢測到肝細(xì)胞中的Activin A表達(dá)增加，其可能主要來源于HSC。然而，Activin A及其信號傳導(dǎo)蛋白在四氯化碳（CCl_4）誘導(dǎo)的急性及慢性化學(xué)性肝損傷中的表達(dá)及其作用機制仍未闡明。 本研究為了探討Activin A在CCl_4誘導(dǎo)小鼠急性及慢性肝損傷中的表達(dá)及其作用，采用腹腔注射CCl_4的方法，建立了小鼠急性及慢性肝損傷模型，通過熒光實時定量PCR、免疫組織化學(xué)染色以及酶聯(lián)免疫吸附實驗等方法，觀察Activin A、激活素IIA型受體（Activin type IIA Receptor, ActRIIA）以及激活素信號蛋白Smads在小鼠肝損傷過程中的表達(dá)；通過尾靜脈注射抗Activin A及ActRIIA抗體阻斷Activin A作用，探討Activin A在肝損傷時的作用。主要研究內(nèi)容包括： 一、CCl_4誘導(dǎo)小鼠急性及慢性肝損傷模型制備 1. CCl_4誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型制備 將適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后的72只C57BL/6小鼠隨機分為橄欖油對照組及CCl_4組。橄欖油對照組以10ml/kg體重橄欖油腹腔注射；CCl_4組以5%CCl_4橄欖油溶液（10ml/kg.BW）腹腔注射，于給藥后1d、3d、5d和7d各取9只小鼠處死，取血清和肝組織進(jìn)行檢測。通過檢測血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶及谷草轉(zhuǎn)氨酶水平、肝組織HE染色驗證肝損傷情況。結(jié)果顯示，CCl_4給藥后1d，肝損傷最為顯著，3d、5d及7d肝臟組織損傷逐漸修復(fù)。以上結(jié)果提示CCl_4誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型制備成功。 2.CCl_4誘導(dǎo)小鼠慢性肝損傷模型制備 將72只C57BL/6小鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，隨機分為2組，橄欖油對照組以10ml/kg體重橄欖油腹腔注射；CCl_4組以5%CCl_4橄欖油溶液（10ml/kg.BW）腹腔注射，每周兩次（周一和周四），連續(xù)六周，于停藥后1d、3d、5d和7d各取9只小鼠處死，收集血清和肝組織，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測。結(jié)果顯示：CCl_4停藥后1d，肝損傷最為嚴(yán)重，masson染色顯示肝組織有膠原沉積，隨著停藥時間延長肝臟組織損傷逐漸修復(fù)，但仍有纖維化存在。以上結(jié)果提示CCl_4誘導(dǎo)小鼠慢性肝損傷模型制備成功。 二、ActivinA及其相關(guān)信號分子在急性及慢性肝損傷時的表達(dá) 酶聯(lián)免疫吸附試驗及熒光實時定量PCR檢測急性及慢性肝損傷小鼠肝組織中ActivinA水平。結(jié)果顯示，在CCl_4誘導(dǎo)小鼠肝損傷組織中，Activin A mRNA及蛋白的表達(dá)水平升高，在1d、3d時升高最為顯著，以后逐漸下降，同時顯示血清Activin A水平在肝損傷小鼠也有類似變化，與血清轉(zhuǎn)氨酶水平變化相似，提示Activin A的異常升高可能參與了CCl_4誘導(dǎo)的肝損傷，且與肝損傷程度相關(guān)，血清ActivinA水平也可能具有輔助判定肝損傷的價值。 在急性及慢性肝損傷中，ActR ⅡA及Smad3mRNA轉(zhuǎn)錄水平也升高，ActR ⅡA及Smad3與Activin A的表達(dá)呈正相關(guān)，在第7天基本恢復(fù)至正常水平。上述結(jié)果提示小鼠肝損傷時Activin A信號途徑活化可能參與了Activin A介導(dǎo)的急慢性肝損傷過程。 三、抗Activin A抗體和ActRIIA抗體阻斷實驗 為了確定Activin A在急性肝損傷中的作用，實驗采用抗Activin A抗體以及抗ActRIIA抗體阻斷內(nèi)源性Activin A作用及封閉ActRIIA作用，觀察對CCl_4誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷的影響。利用C57BL/6小鼠建立動物模型，腹腔注射CCl_42h后，尾靜脈注射抗Activin A抗體或抗ActRIIA抗體，結(jié)果顯示：應(yīng)用抗ActivinA抗體阻斷Activin A的作用或應(yīng)用抗ActRIIA抗體阻斷Activin A與IIA型受體結(jié)合，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）水平均明顯降低；HE染色發(fā)現(xiàn)與IgG+CCl_4組相比，應(yīng)用抗Activin A抗體+CCl_4及抗ActRIIA抗體+CCl_4組肝細(xì)胞病理損傷程度也較輕。上述資料提示Activin A途徑參與了CCl_4誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷過程，可能通過抑制肝細(xì)胞DNA合成及肝細(xì)胞再生，加重CCl_4誘導(dǎo)肝損傷及阻止肝損傷的修復(fù)。 綜上所述，Activin A高表達(dá)可能是加重CCl_4誘導(dǎo)肝損傷的重要因素，Activin A信號途徑活化參與了CCl_4誘導(dǎo)小鼠急性及慢性肝損傷過程。因此，阻斷ActivinA作用，對預(yù)防和治療肝損傷具有重要意義。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R575;R392
【部分圖文】：

CCl4誘導(dǎo)的急性肝損傷模型小鼠肝組織HE染色Fig3.2HEstainingofliverinCCl4-inducedacuteliverinjurymodelmouse5daysCCl4(100×)5daysCCl4(200×)

Cl4誘導(dǎo)的急性肝損傷模型小鼠肝臟組織 ActivinA 免疫組織g3.5 Expression of activin A protein in liver in CCl4-induced acute livmodel mouse assessed by immunohistochemical staining.: Activin A expression was examined by using anti-activin A day after olive oil treatment. C, D: Activin A expression was ei-activin A antibody in liver on 1 day after CCl4treatment. E, Fn was examined by using anti-activin A antibody in liver on 3tment. The procedural background control staining was reprrmal mouse IgG instead of anti-activin A antibody in lived (G) and CCl4-treated (H) mice. Red arrows represent lesiows represent positive staining for activin A. A, C, E, 100×ma

吉林大學(xué)博士學(xué)位論文3.1.2.2 阻斷 Activin A 及 ActR Ⅱ A對肝組織病理損傷的影響HE 染色顯示 IgG+橄欖油對照組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞排列整齊。G+CCl4組顯微鏡下顯示，肝小葉門脈區(qū)有肝損傷病灶及炎癥細(xì)胞浸潤。而抗ctivin A+CCl4組和抗ActRⅡ A+CCl4組均顯示肝小葉門脈區(qū)損傷減輕（圖3.8），一步提示內(nèi)源性 ActivinA 是介導(dǎo) CCl4誘導(dǎo)的肝損傷的重要因素。

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 戴敏,郭順根;細(xì)胞因子與肝纖維化[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2003年04期

2 尤漢寧,李定國,黃新,陳穎偉,張晶,劉清華,徐芹芳;人卵泡抑素基因全長cDNA的克隆[J];上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2004年01期

3 安麗,陳麗,趙平;激活素研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2005年08期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 安麗;激活素對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的保護(hù)作用及其機制的研究[D];山東大學(xué);2004年

2 高慶華;抗纖Ⅰ號復(fù)方中藥抗實驗性大鼠肝纖維化作用及其分子機制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 戴敏;復(fù)方鱉甲軟肝方藥物血清干預(yù)TGF-β_1影響大鼠離體肝星形細(xì)胞活化的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2004年

2 劉群英;抑制素A、激活素A與子vN前期的相關(guān)性研究[D];青島大學(xué);2006年

本文編號：2819863