發(fā)布時間：2020-07-15 06:19

【摘要】：磷酸化修飾是生物體內(nèi)最重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一，蛋白質(zhì)的磷酸化與 去磷酸化過程是真核細胞生命活動最普遍的調(diào)控手段。對磷酸化蛋白質(zhì)的檢測和 磷酸化位點的確定是認識蛋白質(zhì)磷酸化在生命活動中調(diào)控機制的重要參考信息， 用蛋白質(zhì)組學的策略研究生物體的磷酸化修飾也是功能蛋白質(zhì)組學的重要研究 內(nèi)容。由于磷酸化蛋白質(zhì)在生物體內(nèi)的含量很低，對它的檢測和位點分析一直是 個艱難的工作，而磷酸化蛋白質(zhì)的規(guī)�；治龊臀稽c鑒定更是磷酸化蛋白質(zhì)組研 究面臨的技術挑戰(zhàn)。本論文的工作包括基于親和提取和生物質(zhì)譜的磷酸化蛋白質(zhì) 分析方法的建立，以及規(guī)�；姿峄鞍踪|(zhì)分析技術在人胎肝磷酸化蛋白質(zhì)組研 究中的應用。 論文第一章以標準磷酸化蛋白質(zhì)為樣本建立了蛋白質(zhì)磷酸化修飾分析技術 體系：以固相金屬親和色譜為基礎的磷酸肽親和富集技術幫助從復雜的肽混合物 中篩選磷酸肽候選物；MALDI-TOF質(zhì)譜圖中的磷酸肽亞穩(wěn)離子峰輔助判斷絲／蘇 氨酸磷酸化類型；對磷酸肽候選物進行磷酸酶水解實驗結(jié)合質(zhì)譜分析可以直接證 明磷酸肽的存在；最后用串聯(lián)質(zhì)譜分析結(jié)合數(shù)據(jù)庫檢索鑒定用來確定磷酸化位 點。 論文第二章搭建了全程自動化的固相金屬親和色譜-反相液相色譜-串聯(lián) 質(zhì)譜磷酸化蛋白質(zhì)分析平臺，程序控制，方便快捷，便于根據(jù)不同樣本改變實驗 條件，優(yōu)化分析參數(shù)。用標準磷酸肽考察了系統(tǒng)的性能，優(yōu)化了分析參數(shù)并應用 于重組人TRF1的體外磷酸化位點的鑒定，鑒定出2個磷酸化位點，為該蛋白質(zhì) 的激酶磷酸化修飾研究提供了有用的信息。 論文第三章利用所建立的磷酸化蛋白質(zhì)分析方法規(guī)�；治隽巳颂ジ渭毎� 膜提取蛋白質(zhì)中的磷酸化蛋白質(zhì)，共鑒定出28個磷酸肽，36個磷酸化位點，分 別歸屬于21個磷酸化蛋白質(zhì)，其中有27個磷酸化位點是文獻中沒有報道過的。 用兩種磷酸化位點預測軟件對鑒定出來的磷酸化蛋白質(zhì)進行了位點預測，并與鑒 定出的磷酸化位點進行了比較。最后對鑒定出的磷酸化蛋白質(zhì)進行了亞細胞定位 和功能分類分析。
【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R341

【引證文獻】

相關博士學位論文 前1條

1 陳德宏;介孔材料結(jié)構(gòu)和孔道的可控合成及其在電化學和生物分離中的應用[D];復旦大學;2006年

本文編號：2756100