【摘要】：蓖麻毒素（RT）由RTA、RTB兩個肽鏈以二硫鍵共價相連接。RTB是能與半乳糖/N-乙�；肴樘前诽囟ńY(jié)構(gòu)結(jié)合的外源凝集素蛋白，具有凝集素活性。RTB本身無毒性，但可以幫助RTA轉(zhuǎn)運到細胞溶質(zhì)中，抑制蛋白質(zhì)的合成。文獻報道，RTB可以用作異源性疫苗抗原的載體，可融合不同的輪狀病毒抗原VP7、P24、NSP4等，發(fā)揮粘膜佐劑作用。課題組前期研究亦發(fā)現(xiàn)RTB作為佐劑能誘導產(chǎn)生狂犬病毒中和抗體，抗體水平顯著高于普通氫氧化鋁佐劑疫苗，并能加速狂犬病毒疫苗誘導的體液免疫應答。然而對于RTB更多的生物學活性及機制研究國內(nèi)外報道甚少。RTB對免疫細胞活化及細胞內(nèi)的信號傳導通路的影響國內(nèi)外未見報道。本研究采用分子生物學與免疫學技術(shù)探討了RTB對免疫細胞活化及細胞內(nèi)的信號傳導通路的影響。首先探討了RTB對小鼠免疫細胞活化功能的影響。研究發(fā)現(xiàn)，RTB可明顯促進小鼠脾臟淋巴細胞增殖；促進淋巴細胞培養(yǎng)上清中Th1型細胞因子的分泌；并發(fā)現(xiàn)RTB可促進CD4+T細胞的增殖和活化。RTB對小鼠RAW264.7巨噬細胞的活化功能與機制研究表明：RTB可促進RAW264.7細胞NO的分泌；促進iNOS基因與蛋白的表達；增強巨噬細胞的吞噬能力；促進IL-6和TNF-α基因與蛋白的表達。采用小鼠蛋白芯片抗體陣列對巨噬細胞與炎癥相關(guān)的40種蛋白的變化進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MCP-1、TNF-α、MIP-1α，MIP-1β，MIP-2，RANTES，TIMP-1，CD54的表達增高，G-CSF、KC的表達下調(diào)。RTB對RAW264.7巨噬細胞活化過程中的信號轉(zhuǎn)導通路的影響研究表明：酪氨酸蛋白激酶介導的信號通路抑制劑、蛋白激酶C信號通路抑制劑和核因子κB信號通路抑制劑，可以抑制RTB誘導RAW264.7細胞NO分泌和iNOSmRNA表達以及TNF-α和IL-6mRNA和蛋白水平表達，提示酪氨酸蛋白激酶、蛋白激酶C和核因子κB信號通路可能參與RTB誘導巨噬細胞活化。采用RTB對酪氨酸蛋白激酶信號通路相關(guān)磷酸化位點分子進行蛋白組學分析，結(jié)果提示RTB通過影響RAW264.7細胞酪氨酸蛋白激酶信號途徑SRC、JAK-STAT和核因子κB信號途徑IκB-α蛋白磷酸化，激活酪氨酸蛋白激酶和NF-κB信號轉(zhuǎn)導途徑。 Western blot和免疫熒光實驗結(jié)果進一步證實RTB通過誘導巨噬細胞IκB-α磷酸化進而促進NF-κB核轉(zhuǎn)位作用。 上述結(jié)果提示RTB可以調(diào)節(jié)免疫細胞活化，對巨噬細胞的活化可通過細胞內(nèi)的多條信號轉(zhuǎn)導途徑參與。提示RTB誘導巨噬細胞活化可能通過多條信號轉(zhuǎn)導途徑互相調(diào)節(jié)、共同作用。本研究為RTB免疫生物學活性研究及其免疫佐劑等方面的應用提供了新的科研資料，并奠定了實驗依據(jù)與理論基礎(chǔ)。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R392.12

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本文編號：2747833