發(fā)布時間：2020-07-07 06:54

【摘要】：目的: 自身免疫性疾病是目前公認的一類難治性人類重大疾病,嚴重威脅人類健康。實驗性變態(tài)反應性腦脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE)由于與人的多發(fā)性硬化病(MS)和急性腦脊髓炎在臨床表現、生化指標及病理等方面具有相同特征性,因而一直是研究神經系統自身免疫性疾病的良好模型,也是Th1細胞介導的器官特異性自身免疫性疾病的典型代表。目前這類疾病的治療措施主要是長期采用各種非特異的免疫抑制劑,往往會使患者免疫系統受到普遍性抑制而導致嚴重的感染和腫瘤發(fā)生等。因而有關自身免疫性疾病的特異性免疫治療一直是人們密切關注、有望成為一個突破口的研究熱點。在近年基礎免疫學研究進展的啟發(fā)下,本課題選擇新近發(fā)現的活化T細胞的表面標記IL-18受體(IL-18R)為靶點,構建重組免疫毒素IL-18-PE38的表達質粒,并通過基因治療技術將其接種于EAE模型鼠體內,觀察實驗動物EAE癥狀及體征的改善情況以及相關細胞因子的動態(tài)變化來評價其治療效果,并探討其抗自身免疫性疾病的作用機理。 方法: (1)采用RT-PCR法從小鼠肝總RNA中擴增mlL-18目的基因片段,
【學位授予單位】：四川大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R392
【圖文】：

利用Triozl試劑獲得小鼠肝總RN.A，RNA電泳結果如圖1一1所示，可見三條明顯的主帶，分別是5s一5.85，185和285，條帶亮度良好，各條帶區(qū)分明顯，說明獲得的總RNA濃度和純度均較高。圖1一1小鼠肝總RNA電泳圖Fgil·1EleertoPhoresisPa材七mofotatlRNAoflivertissue1.2R-TPCR的擴增產物以小鼠肝總RNA為模板，用m幾一18的特異性引物，通過Rl’-pCR擴增反應后

顯示一條約46sobp大小的片段;而用Ndel艦indl、托nd皿EcoUI及NdeE/lco肚進行雙酶切反應后，則分別顯示有48obp、11sobp及1640bp左右的目的條帶，如圖1一3所示，這些片段的大小分別符合幾一18、PE38及幾一18一PE38基因片段的大小。因而從酶切結果顯示，目的基因片段已正確插入到原核表達載體并構成了重組質粒PRKL一幾18一E38，其結構示意圖譜如圖1一o4

Fgil一6LI一18一PE38序列測定DNAseuqneeeofL一18一PE38gnee

【參考文獻】

相關期刊論文 前8條

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本文編號：2744793