【摘要】：目的：(1)探討微生物抗原通過TLR及相關(guān)信號通路介導角膜上皮細胞IL-33產(chǎn)生,并揭示IL-33在Th2主導的固有免疫反應中的潛在作用。(2)明確IL-33的受體ST2是否在角膜上皮細胞中存在并探討ST2的功能。(3)探討IL-33/ST2信號通路在調(diào)節(jié)角膜上皮細胞產(chǎn)生炎癥因子過程中的作用。方法：(1)分別用不同的病毒或細菌成分作為TLRs的配體刺激人角膜組織或原代培養(yǎng)的角膜上皮細胞,提前2h加入不同的抑制劑,探索不同配體誘導角膜上皮細胞產(chǎn)生IL-33的機制和具體的信號通路。(2)用外源性合成的人IL-33刺激人角膜組織或原代培養(yǎng)的角膜上皮細胞,提前2h加入不同的抑制劑,檢測受體ST2在角膜上皮細胞的表達、定位以及尋找IL-33通過ST2及其下游的相關(guān)信號通路誘導角膜上皮細胞相關(guān)炎癥因子產(chǎn)生的機制。(3)用熒光定量PCR檢測mRNA的表達,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、免疫組織化學染色、免疫熒光染色Western blotting檢測蛋白水平的產(chǎn)物。結(jié)果：(1)分別從mRNA水平及蛋白水平證實了TLR3-7的配體都可以刺激人角膜上皮細胞產(chǎn)生IL-33,其中TLR3的配體polyI:C和TLR5的配體flagellin是相對較強的IL-33誘導劑。(2)IL-33的前體蛋白通常存在于細胞內(nèi),被ATP激活后就從胞內(nèi)分泌到細胞外。(3)PolyI:C誘導的IL-33可以被TLR3抗體或TRIF抑制劑阻斷；而flagellin誘導的IL-33可以被TLR5抗體或MyD88抑制劑阻斷。(4)IκB-α抑制劑BAY11-7082或者是NF-κB激活抑制劑喹諾唑啉都可以通過阻斷NF-κB p65進而抑制PolyI:C或flagellin刺激角膜細胞產(chǎn)生的IL-33。(5)在供體人角膜組織及原代培養(yǎng)的角膜上皮細胞中均發(fā)現(xiàn)IL-33的受體ST2的表達。并且IL-33刺激角膜上皮后ST2在mRNA及蛋白水平均有所增加。(6)外源性合成的IL-33在mRNA和蛋白水平均可以刺激角膜上皮細胞產(chǎn)生炎癥因子(TNF-α, IL-1β, IL-6)和趨化因子IL-8,并且這種刺激可以被ST2中和抗體或分泌型ST2阻斷。(7) Iκ B-α抑制劑BAY11-7082或者是NF-κB激活抑制劑喹諾唑啉都可以阻斷NF-κB p65蛋白的磷酸化和核轉(zhuǎn)移,并且阻斷IL-33刺激角膜上皮細胞產(chǎn)生的炎癥因子。結(jié)論：(1)微生物配體通過TLR受體介導的信號通路刺激角膜上皮細胞產(chǎn)生上皮源性的的炎癥因子IL-33,提示角膜上皮細胞在Th2支配的免疫性炎癥中起重要作用。(2)ST2表達于角膜上皮,并且IL-33/ST2信號通路在調(diào)節(jié)IL-33介導的角膜上皮細胞炎癥反應過程起重要作用。
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Tissue factor with age-related macular degeneration[J];International Journal of Ophthalmology(English Edition);2012年05期

本文編號：2738453