【摘要】：細胞增殖(cell proliferation)和細胞凋亡(apoptosis)是兩種對立的最基本的細胞活動。在生理水平上這兩種生命活動緊密相關、相互調節(jié),它們的協(xié)調和平衡直接影響了細胞和組織的正常發(fā)育和體內的動態(tài)平衡,也影響了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。從分子生物學角度來看,腫瘤相關基因的表達與調控決定了腫瘤的增殖和凋亡。 Bcl-2/adenovirus E1B 19 kDa interacting protein 2-like, BNIP2-like (BNIPL)是上海市腫瘤研究所通過大規(guī)模功能篩選獲得的影響細胞生長的人類新基因。該基因有5種亞型,通過SMART RACE的方法獲得了其中兩種的全長的cDNA序列,分別為BNIPL-v1和BNIPL-v2。序列分析表明,BNIPL-v1含有2147bp,BNIPL-v2含有2353bp,都有完整的3’端和5’端,起始密碼子為ATG,起始翻譯序列符合Kozak規(guī)律。BNIPL-v1開放閱讀框含1074bp,編碼357個氨基酸,預計分子量為39.7kDa;BNIPL-v2開放閱讀框含828bp,編碼275個氨基酸,預計分子量為30.9kDa。BNIPL-v1和BNIPL-v2在GenBank的登錄號分別為AY033000和AF193056。蛋白質同源序列分析表明結果表明BNIPL-v1和人BNIP2、鼠BNIP2在蛋白質水平有68%的同源;BNIPL-v2和人BNIP2、鼠BNIP2在蛋白質水平有72%的同源。BNIPL蛋白含有兩個保守結構域SEC14 domain和BCH domain。 BNIPL定位于染色體1q21.1區(qū)段,GFP融合蛋白亞細胞定位實驗表明BNIPL蛋白在胞漿中表達,Norther雜交結果表明BNIPL在人的正常的肺和胎盤組織中高表達。雖然BNIPL含有釀酒酵母Sec14p的SEC14 domain,但是基因功能互補實驗結果發(fā)現(xiàn),在酵母細胞內BNIPL并不能與釀酒酵母Sec14p蛋白功能互補。利用酵母雙雜交技術,通過篩選人肺cDNA文庫,獲得了4個與BNIPL相互作用的候選蛋白:巨噬細胞遷移抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor, MIF),生長因子(growth factor, ervl (S. cerevisiae)-like, GFER),核苷二磷酸激酶B(nm23-H2/NDP(Nucleoside diphosphate) kinase B)和FK506結合蛋白38(FK506 binding protein 38,FKBP38)。利用GST Pulldown和Co-immunoprecipitate實 WP=6 驗分別在體外和體內驗證了BNIPL可以分別和MIF、GFER、nm23-H2和FKBP38發(fā)生蛋白質的相互結合。 我們通過克隆集落形成實驗和對細胞生長曲線的測定,研究發(fā)現(xiàn)BNIPL的過量表達能夠抑制腫瘤細胞的生長,并且通過流式細胞術檢測細胞膜表面磷脂酰絲氨酸的外翻變化,發(fā)現(xiàn)BNIPL具有促進腫瘤細胞凋亡的功能。因為BNIPL與其相互作用的蛋白FKBP38分別可以與Bcl-2結合,也就是說三種蛋白可以兩兩之間發(fā)生蛋白質的相互結合,分析認為BNIPL可能是參與了FKBP38-Bcl-2復合物的構成或者復合物定位的調控,抑制Bcl-2的功能,從而促進細胞凋亡。 為了進一步研究MIF、nm23H2與BNIPL的相互作用對細胞生長的影響,以及它們相互作用的生物學意義,我們利用Tet-on基因表達系統(tǒng)構建了可調控表達BNIPL,持續(xù)表達MIF或nm23-H2的Hep3B穩(wěn)定細胞株。利用流式細胞術來研究BNIPL及其相互作用的蛋白MIF和nm23-H2分別表達和共同表達對細胞周期分布和細胞凋亡的影響。實驗結果表明,BNIPL和nm23-H2分別具有促進細胞凋亡的功能,兩者處于Bcl-2上游的兩條不同的調控途徑中,當BNIPL和nm23-H2共同表達并發(fā)生蛋白質相互作用時,兩者相互抑制,表現(xiàn)為抑制細胞凋亡。 BNIPL參與細胞增殖的途徑是與MIF、GFER發(fā)生蛋白質相互作用。我們主要研究了BNIPL與MIF的蛋白質相互結合,認為BNIPL對細胞增殖的抑制作用,主要是抑制了MIF的促細胞生長的功能實現(xiàn)的;反之,MIF也可以通過與BNIPL結合抑制由BNIPL誘導的細胞凋亡的產生。 本文的研究結果為進一步確定BNIPL基因在細胞增殖和細胞凋亡網絡中的調控作用提供了一些有益的線索。
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：Q987

【相似文獻】

相關會議論文 前10條

1 鄭雄偉;林賢東;力超;師怡;陳剛;陳德東;劉友曉;;NM23基因多態(tài)性與胃癌遺傳易感性[A];全國腫瘤流行病學和腫瘤病因學學術會議論文集[C];2011年

2 孫文文;周發(fā)林;楊麗詩;黃建華;朱彩艷;蘇天鳳;江世貴;;斑節(jié)對蝦nm23基因的cDNA克隆與表達分析[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉變——2011年中國水產學會學術年會論文摘要集[C];2011年

3 曹云新;韓衛(wèi)寧;白慶咸;楊安鋼;;金喜素對白血病JM細胞的抑制作用及其凋亡的影響[A];全國中西醫(yī)結合基礎理論學術研討會論文集[C];2004年

4 許沈華;凌雨田;朱赤紅;;用流式細胞術檢測中國人外周血6種細胞因子水平[A];第6次全國微生物學與免疫學大會論文摘要匯編[C];2004年

5 梁學穎;李賓;;三色熒光流式細胞術胞內細胞因子分析[A];第三屆全國現(xiàn)代生物物理技術學術討論會論文摘要匯編[C];2000年

6 張紅凱;嚴美申;趙鐵華;顏琳琳;陳偉東;;ER,PR,nm23,P53,mdr,c-erbB-2在子宮內膜癌中的表達及意義[A];第八次全國婦產科學學術會議論文匯編[C];2004年

7 武培敬;陳海霞;許艷梅;韓庶勇;武衛(wèi)華;;CD_(44)V_6、EGFR及nm23在食管鱗癌組織中的表達[A];2000全國腫瘤學術大會論文集[C];2000年

8 王衛(wèi)華;王峰;陳潔;汪麗;鄒循亮;顧欣;周彬雷;于宏升;;流式細胞技術檢測漢坦病毒抗原血癥及臨床應用[A];第6次全國微生物學與免疫學大會論文摘要匯編[C];2004年

9 黃莎莎;林鵬;趙明;;PCNA、nm23的表達與下咽癌及喉癌的臨床關系[A];第四屆中國腫瘤學術大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學術會議論文集[C];2006年

10 周濟春;魏星;裘華森;;nm23、GST-π在胃癌中表達及臨床意義[A];第五屆中國中西醫(yī)結合圍手術期醫(yī)學研討會論文集[C];2010年

相關重要報紙文章 前6條

1 記者 黃才剛;肝癌宜因人施治[N];健康報;2000年

2 陳漢橋;大連提出肺泡細胞癌診治新依據(jù)[N];中國醫(yī)藥報;2001年

3 劉鳳云;卵巢癌早診率大幅提高[N];健康報;2004年

4 侯培東;流式細胞分析——檢驗技術的飛躍[N];健康報;2005年

5 王勉 周俏春;廣西研究原發(fā)性肝癌個體化治療技術獲新進展[N];中國高新技術產業(yè)導報;2001年

6 傅冬紅;涎腺腫瘤臨床病理研究獲獎[N];中國醫(yī)藥報;2001年

相關博士學位論文 前10條

1 沈利;人類新基因BNIPL生物學功能的初步研究[D];復旦大學;2004年

2 李文;卵巢癌相關新基因NM23-H1B的克隆和功能研究[D];第二軍醫(yī)大學;2004年

3 倪曉華;人類基因PanK、Rab2B、NM23-H1B和VRK3的克隆和功能研究[D];復旦大學;2003年

4 程力;PTEN、nm23、bcl-2、P53與胃癌細胞轉移的臨床研究[D];山東大學;2005年

5 王海峰;nm23及E-cadherin與Ⅰ期非小細胞肺癌淋巴結微轉移及預后關系的研究[D];第二軍醫(yī)大學;2010年

6 孫百順;VEGF-C、FLT-4和nm23在人類乳腺癌中的表達及意義[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2006年

7 陳曉峰;E-cadherin和nm23與非小細胞肺癌術后淋巴結轉移及預后的相關性研究[D];第二軍醫(yī)大學;2008年

8 張文麗;大腸癌線粒體氧化損傷及mtDNA突變的研究[D];中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學;2003年

9 曲凌云;三種養(yǎng)殖扇貝熱休克蛋白HSP70在逆境因子下的表達和相關基因的克隆[D];中國科學院研究生院（海洋研究所）;2004年

10 郭鴻涌;工頻勻強磁場對正常細胞和腫瘤細胞凋亡與增殖影響的研究[D];河北工業(yè)大學;2004年

相關碩士學位論文 前10條

1 石衛(wèi)東;VEGF、CD34、COX-2、nm23在食管癌組織中的表達及生物學意義[D];河北醫(yī)科大學;2003年

2 陳晉;nm23、α_5β_1和VEGF在乳腺癌中的表達及臨床意義[D];重慶醫(yī)科大學;2002年

3 申培紅;nm23、MMP-2、TIMP-2在乳腺腫瘤中的表達及其與癌浸潤轉移的關系[D];鄭州大學;2003年

4 安琦;bcl-2、nm23基因表達與涎腺粘液表皮樣癌病理組織學分級及臨床分期的相關性研究[D];山西醫(yī)科大學;2012年

5 于博;nm23在非小細胞肺癌中的表達[D];中國醫(yī)科大學;2004年

6 馬哈穆德·凱依塔(MAHAMOUDOU KEITA);nm23、p21ras、VEGF和ER在乳腺癌組織中的表達及其與臨床預后的關系[D];廣西醫(yī)科大學;2000年

7 胡衛(wèi)東;微血管密度和nm23、VEGF蛋白表達在胃癌中的臨床意義[D];蘇州大學;2001年

8 王巍;PCNA、nm23在鼻腔鼻竇惡性腫瘤中的表達與腫瘤預后的關系[D];天津醫(yī)科大學;2004年

9 李傳平;CD15和nm23在膀胱移行細胞癌的表達及臨床意義[D];江西醫(yī)學院;2000年

10 閆亮;食管鱗癌中uPA、P-選擇素、nm23、p27的表達及其與浸潤轉移關系的研究[D];鄭州大學;2004年

本文編號：2734800