【摘要】：胚胎著床涉及免疫細胞、免疫分子、細胞因子、粘附分子等,是一個極其復雜的生理過程,是胚胎與母體雙向調(diào)控的結(jié)果。整合素介導粘附與信號傳導兩大功能,在胚胎著床、免疫、創(chuàng)傷修復等生理病理過程中起重要作用。近幾年,整合素在胚胎著床中的作用已成為研究熱點,日益受到重視。研究發(fā)現(xiàn)整合素αvβ3在子宮內(nèi)膜容受性達到最高狀態(tài)時開始表達,是子宮內(nèi)膜容受性的標識分子。在胚胎著床過程中,多種整合素可在胚胎、子宮內(nèi)膜和胎盤表達并發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用,其中整合素αvβ3直接參與子宮內(nèi)膜與滋養(yǎng)層細胞的識別粘附,以及滋養(yǎng)層細胞的浸潤,調(diào)控胚胎植入。 本文利用siRNA干擾技術(shù),設計人絨毛膜滋養(yǎng)層細胞HVT整合素alpha V的siRNA干擾片段,篩選出高沉默效率的整合素alpha V的特異性siRNA序列,包裝具有高沉默效率siRNA的逆轉(zhuǎn)錄病毒,成功構(gòu)建了逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導siRNA沉默alpha V基因的HVT穩(wěn)定細胞株。免疫熒光和免疫共沉淀技術(shù)發(fā)現(xiàn)SPP1蛋白與整合素αvβ3存在相互作用位點。研究發(fā)現(xiàn)沉默整合素alpha V基因,可以減弱SPP1刺激的mnTOR蛋白、AKT蛋白、P38蛋白、ERK蛋白、P70S6K蛋白、RPS6蛋白的磷酸化,對PDK1蛋白表達沒有影響；也減弱了HVT細胞的增殖。 利用尾靜脈注射整合素αvβ3拮抗劑SB-273005后發(fā)現(xiàn)實驗小鼠用藥后胚胎植入數(shù)及妊娠率明顯下降(P0.05)；HE染色顯示SB-273005導致子宮內(nèi)膜蛻膜化不完全,如蛻膜增厚,間質(zhì)水腫伴大量炎癥細胞浸潤或蛻膜變薄,間質(zhì)致密,細胞深染；免疫組化、RT-PCR、Western Blot各種結(jié)果均顯示SB-273005可使小鼠胚胎植入窗口期子宮內(nèi)膜αvβ3的表達量明顯減少。另外,在總FAK、AKT、ERK1/2表達水平不變的基礎(chǔ)上,子宮內(nèi)膜p-FAK、p-AKT、p-ERKl/2的表達明顯減低,SB-273005可能抑制了整合素avβ3介導的信號傳導過程,最終抑制滋養(yǎng)細胞的存活、增殖、遷移,影響胚胎向子宮內(nèi)膜的植入；SB-273005還可以導致細胞周期蛋白CyclinDl的表達下降、P21cip1的表達升高,使完整的細胞周期無法順序完成,誘導細胞凋亡的發(fā)生而影響妊娠時的胚胎植入。SB-273005處理小鼠外周血的NK1.1細胞及Th1/Th2比例顯著增加,IFN-γ水平明顯增加,說明SB-273005能夠增加pNK細胞的水平,提高妊娠失敗的幾率；實驗組小鼠血清中含有較高濃度的IL-2、TNF、IFN-、IL-17A及較低濃度的IL-6, IL-10, SB-273005通過增加外周血NK及Thl類型細胞的數(shù)量,增加孕鼠的免疫毒性而排斥胚胎進入子宮。 通過上述研究,我們得出結(jié)論,阻斷整合素αvβ3可能通過兩方面影響胚胎著床：一方面整合素參與了PI3K-AKT1和FRAP1-P70S6K-RPS6信號轉(zhuǎn)導通路,這可能是對細胞信號通路的補充。我們將進一步探討整合素是否通過阻礙細胞遷移、粘附和細胞識別,干擾子宮內(nèi)膜與滋養(yǎng)層的細胞識別粘附,抑制胚胎入侵和生長；另一方面,逆轉(zhuǎn)妊娠中Th2細胞及細胞因子的優(yōu)勢,阻斷免疫耐受的形成,抑制小鼠胚胎著床。本文初步闡明了整合素αvβ3調(diào)控小鼠胚胎著床的機理,為不明原因不孕不育及為新型避孕藥物的開發(fā)提供了理論依據(jù)。
【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R321.3

【參考文獻】

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本文編號：2733076