發(fā)布時間：2020-05-17 20:43

【摘要】：組織移植是整形外科常用的治療手段之一。目前整形外科臨床 應用最多的是自體組織移植，但自體組織存在來源有限、損害供區(qū)、 增加患者痛苦等不足。異體（種）組織來源廣泛，取材方便，形狀 逼真，但免疫排斥反應的存在使其在整形外科的臨床應用受到極大 的限制。 既往的研究表明，異體組織移植排斥反應的發(fā)病機理主要為T 淋巴細胞介導的免疫應答。盡管免疫抑制劑能夠降低T淋巴細胞活 性，但應用后常常造成全身免疫狀態(tài)低下、易發(fā)生感染等危險。因 此，如能單純消除移植物周圍局部浸潤激活的T淋巴細胞，則能在 不損害全身免疫狀態(tài)的情況下使移植物免受排斥反應而存活。近年 來對免疫赦免的研究結果為這一設想的實現(xiàn)帶來了曙光。 人們很早就發(fā)現(xiàn)人體內(nèi)存在著一些免疫赦免區(qū)如眼球、睪丸及 腦組織等。近來的研究發(fā)現(xiàn)這些部位的組織均能表達FasL，很可能 通過Fas/FasL途徑誘導Fas~+的T淋巴細胞凋亡，從而形成局部無淋 巴細胞浸潤的免疫赦免環(huán)境。在睪丸組織中睪丸足細胞持續(xù)表達 FasL。 上述研究結果啟發(fā)人們能夠應用FasL 或睪丸足細胞保護異體 （種）組織移植物，使移植物免受排斥反應的侵害，延長其在受體 內(nèi)的存活。雖然目前對FasL保護異體（種）移植物的作用尚存有爭 議：1、FasL延長異體（種）移植物在受體內(nèi)的存活，2、FasL作為 前炎性分子，吸引并激活粒細胞，加劇而不是抑制移植排斥反應的 發(fā)生，但動物實驗的結果卻都顯示睪丸足細胞與異體細胞混合移植， 延長了移植細胞在受體內(nèi)的存活。然而對睪丸足細胞在此過程中的 具體作用機制及調控因素尚未完全闡明。 2 第二軍醫(yī)人學慚卜論義 中義摘要－3－ 本研究的目的是： 1．觀察體外條件下睪丸足細胞對成熟T淋巴細胞凋亡的影響。 2．探討睪丸足細胞誘導T淋巴細胞凋亡的具體機制。 3．深入了解FasL在睪丸足細胞誘導T淋巴細胞凋亡過程中的作用。 4．探討應用FasL及睪丸足細胞保護異體（種）移植物的可行性， 為應用翠丸足細胞及FasL保護異體（種）移植物的在體研究及 臨床應用提供實驗依據(jù)。 本研究包括以下主要內(nèi)容： 一、體外聯(lián)合培養(yǎng)條件下小鼠暈丸足細胞對成熟T淋巴細胞影響的 研究 目的：探討體外聯(lián)合培養(yǎng)條件下小鼠睪丸足細胞對成熟T淋巴 細胞凋亡的影響。方法：用TUNEL標記，核酸電泳、電鏡、流式細 胞術檢測對照組廠淋巴細胞卜A組廠淋巴細胞＋培養(yǎng)睪丸足細胞24 h培養(yǎng)上清卜 B組廠淋巳細胞＋睪丸足細胞乃組中小鼠成熟 T淋巴 細胞的凋亡及其量的變化。結果：3組細胞電鏡下均可見部分細胞染 色質濃集，成塊狀或環(huán)狀位于核膜內(nèi)側，核固縮，，凋亡小體形成； TUNEL標記見部分細胞核染色呈深藍色；核酸電泳均出現(xiàn)典型DNA 梯狀帶（ladder）：流式細胞術檢測 A、B兩組 T淋巴細胞凋亡量均 明顯高于對照組u＜0刀1XB 組T淋巴細胞凋亡量顯著高于A組 （尸＜0刀1）。 二、暈丸足細胞體外誘導成熟T淋巴細胞凋亡時FasL作用的研究 目的：研究 FasL在睪丸足細胞誘導成熟 T淋巴細胞凋亡過程中 的具體作用。方法：設計正義、反義及錯配引物阻斷宰丸足細胞FasL 3 第＿軍匝人學助1：論義 中義摘要－4－ 的表達，建立轉染FasL基因井持續(xù)表達的小鼠表皮細胞株，運用原 位雜交、免疫組化、Western blot 等檢測上述細胞及其培養(yǎng)上清中 FaSL的表達，運用流式細胞學技術檢測上述細胞與成熟 T淋巴細胞 混合培養(yǎng)后T淋巴細胞凋亡率的差異。結果：翠丸足細胞及其培養(yǎng) 上清中均有FasL的表達，轉染FasL基因的表皮細胞有FasL的表達， 但其培養(yǎng)上清中則未檢測到FasL蛋白的表達，反義引物作用后在睪 丸足細胞及其上清中基本檢測不到FasL；轉染與未轉染的表皮細胞 誘導T淋巴細胞凋亡量無明顯區(qū)別（尸＞0刀5），經(jīng)反義引物作用后睪 丸足細胞誘導T淋巴細胞凋亡量顯著減少（P＜0刀1）。 結 論： 1．體外條件下睪丸足細胞能夠誘導成熟T淋巴細胞凋亡。 2．FasL是睪丸足細胞體外誘導成熟T淋巴細胞凋亡過程中的主要因 素但不是唯一因素；睪丸足細胞主要是由于表達FasL從而誘導表達 Fas的成熟T淋巴細胞凋亡，這可能是形成睪丸免疫赦免的主要機制。 3．轉染有FasL基因并持續(xù)表達的細胞不能有效地誘導成熟T淋巴 細胞凋亡；FasL誘導成熟 T淋巴細胞凋亡尚需其它蛋白的協(xié)同作用； 單純轉染FasL基因尚不能使同種異體移植物免受排斥反應的損害。
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2000
【分類號】：R392.4

【參考文獻】

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1 時玉舫,張莉英,王若翔;Fas和FasL:免疫細胞的自殺和謀殺[J];上海免疫學雜志;1997年04期

本文編號：2669154