【摘要】：EB病毒(Epstein-Barr Virus, EBV)是一種致瘤病毒,已證明多種人類惡性腫瘤如Burkitt's淋巴瘤、霍奇金病、鼻咽癌和胃癌等與EBV感染相關。EBV感染能導致一系列的細胞效應,尤其是宿主細胞蛋白質合成途徑在病毒侵入后出現明顯變化。因此,在EBV感染和未感染細胞之間就出現了蛋白表達譜的差異,而這些差異蛋白正是病毒感染細胞、細胞抵御病毒的具體執(zhí)行者,尋找并鑒定這些蛋白將對認識EBV感染機制提供大量的研究線索。本研究運用比較蛋白組技術對EBV感染胃上皮AGS細胞前后出現的差異表達蛋白進行分析,初步探索病毒—宿主相互作用,對于進一步闡明EBV的感染機制及EBV在胃癌發(fā)生發(fā)展中可能的作用和機制具有十分重要的意義。 本論文由三部分組成：第一章前言概述了EB病毒感染與胃癌的相關性,以及比較蛋白質組學在病毒學的研究現狀。本課題將比較蛋白質組學與病毒學相結合,并提出本課題的研究方向。 第二章EB病毒感染的胃上皮AGS細胞系的建立,培養(yǎng)及鑒定：采用cell-to-cell感染法建立EB病毒感染的胃上皮AGS細胞系,并通過原位雜交及電子顯微鏡對EB病毒感染的胃上皮AGS細胞系進行驗證性檢測。原位雜交和電鏡實驗結果表明：在EB病毒感染的胃上皮AGS細胞的細胞核內均可檢測到EBV EBER-1的表達；在EB病毒感染的胃上皮AGS細胞的胞漿內存在明確的EB病毒顆粒。 第三章EB病毒感染AGS的比較蛋白質組學分析為了分析感染病毒后宿主細胞蛋白表達譜的變化,本研究利用蛋白質組學技術對EBV感染和未感染的AGS細胞進行了比較蛋白質組學分析。結果顯示,在EBV感染AGS細胞后共有11個蛋白點的表達水平發(fā)生了至少2.0倍的上調或下調變化。在這些差異表達蛋白中,我們用質譜(MALDI-TOF和LC-ESI-IT MS)成功鑒定出9種蛋白質,對應于5個上調表達和4個下調表達蛋白質。5個上調表達蛋白質是：熱休克同源71kDa蛋白(heat shock cognate71kDa protein),細胞質肌動蛋白-1(actin cytoplasmic1),吡多辛-5-磷酸鹽氧化酶(pyridoxine-5'-phosphate oxidase),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase9), T復合物蛋白1亞單位α[(t-complex protein1subunit alpha);4個下調表達蛋白是：鋅指蛋白-2(zinc finger protein2),細胞周期素依賴性激酶-2(cyclin-dependent kinase2),巨噬細胞加帽蛋白(macrophage capping protein),生長分化因子-11(growth/differentiation factor11)。 為了檢驗蛋白質組研究結果,我們選取細胞周期素依賴性激酶-2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9進行了Western-Blot驗證。結果顯示：細胞周期素依賴性激酶-2在EBV感染的胃上皮AGS細胞組中下調表達；同時,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9在EBV感染的胃上皮AGS細胞組中上調表達。這些結果表明兩種蛋白的變化趨勢與雙向凝膠電泳中兩種蛋白點變化趨勢一致,進一步證明了本研究的蛋白組學結果正確。 在我們所發(fā)現的差異蛋白中,下調表達的細胞周期素依賴性激酶-2是細胞周期中的重要調控因子之一,我們推測：EBV可能通過改變細胞周期調控,引起細胞周期紊亂,而導致細胞惡性增殖。上調表達的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9是細胞凋亡的重要的起始因子。我們推測：EBV感染AGS細胞以后,細胞凋亡的調節(jié)可能是宿主細胞對病毒的防御機制之一。 綜上所述,細胞周期素依賴性激酶-2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9在EBV感染中可能存在重要作用。其它的蛋白質則有待于進一步研究。本研究結果的這些數據為進一步研究EBV感染的機制和致病機理提供了蛋白質相關基礎信息。 圖8幅,表6個,參考文獻103篇。
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R373.9

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