【摘要】：約10％的夫婦是不育的，其中一半為男方原因所致。在眾多的男性不育病因中，伴有無精和嚴(yán)重寡精的原發(fā)不育占有較大比例并與遺傳因素密切相關(guān)。此外，精子發(fā)生也是研究個體發(fā)育和細(xì)胞分化過程中基因次遞表達(dá)的一個優(yōu)良模型。因此，生精過程相關(guān)基因的研究對深入了解精子發(fā)生的分子機(jī)理和闡明男性原發(fā)不育的遺傳病因具有重要的理論和臨床意義。 小鼠作為一種模式生物被廣泛地運(yùn)用在精子發(fā)生相關(guān)基因的功能研究中。本文運(yùn)用cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)和電子克隆的方法，克隆了人類精子發(fā)生相關(guān)基因ZNF230的小鼠同源基因znf230(GenBank接受號AF353167)。后者cDNA全長982bp，編碼230個氨基酸，分子量26kD的肽鏈。生物信息學(xué)分析的結(jié)果顯示：1)小鼠znf230蛋白同樣包括一個C3HC4型鋅指蛋白結(jié)構(gòu)域；2)與人ZNF230基因相比，兩者的核酸和氨基酸序列高度同源，分別為92％和98％；3)兩者鋅指域的 同源性高達(dá)100%，與其它物種來源的C3HC4型鋅指蛋白相比，該結(jié)構(gòu) 域在進(jìn)化上高度保守，提示其功能也可能保守;4)用PSORT軟件分析 的結(jié)果提示，該基因定位于細(xì)胞核中;5)小鼠znf230基因的基因組 序列全長28kb，，將其cDNA分為6個外顯子，其內(nèi)含子和外顯子的剪 切位點符合GT一AG規(guī)則;6)根據(jù)小鼠znf230基因組序列的定位信息 和人一小鼠同源圖譜分析，將小鼠基因定位于7號染色體。 用Northern雜交對小鼠znf23o基因表達(dá)的時空特異性進(jìn)行研究 的結(jié)果顯示:與人ZNF23O基因相似，預(yù)期的Ikb大小的轉(zhuǎn)錄本只在 辜丸中表達(dá)，為辜丸特異表達(dá)的轉(zhuǎn)錄本;而4.4kb的轉(zhuǎn)錄本除了在 心、腦、骨骼肌、腎表達(dá)外(與人ZNF230基因一致)，也在肺、肝、 摹丸中表達(dá);此外，在心、肝和腎中還有一個2.4kb的轉(zhuǎn)錄本。多組 織RT一PCR實驗進(jìn)一步證實了上述結(jié)果。 用RT一PCR對不同發(fā)育階段的小鼠znf230基因的表達(dá)進(jìn)行研究的 結(jié)果表明，該基因在產(chǎn)后6天開始表達(dá)，產(chǎn)后14一21天達(dá)到最高峰， 即達(dá)到成年時的表達(dá)水平，此期間完成了由A型精原細(xì)胞到圓形精子 細(xì)胞的第一輪分化。己知人ZNF230基因的不表達(dá)導(dǎo)致生精過程阻滯在 精細(xì)胞期，因此，可以初步推斷小鼠znf230基因及其人類同源基因可 能與精子細(xì)胞的生成有關(guān)。 酵母單雜交的結(jié)果顯示，小鼠znf230蛋白具有轉(zhuǎn)錄激活活性，并 可能主要是通過鋅指結(jié)構(gòu)域起作用，而要達(dá)到最大轉(zhuǎn)錄激活活性，則 可能同時需要非鋅指結(jié)構(gòu)域的存在。體外轉(zhuǎn)錄翻譯和Southwestern雜 交證實，26kD的小鼠znf230蛋白具有DNA結(jié)合能力。生物信息學(xué)和 綠熒光蛋白標(biāo)記的活細(xì)胞內(nèi)亞細(xì)胞定位實驗表明znf230蛋白定位于細(xì) 胞核內(nèi)，因此，初步推測該基因可能作為生殖細(xì)胞特異的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因 子，參與精原細(xì)胞向圓形精子細(xì)胞分化過程的基因表達(dá)調(diào)控。 關(guān)鍵詞:精子發(fā)生znf230基因鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄調(diào)控
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R346;Q78

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本文編號：2633356